[發(fā)明專利]硫磺素T的應(yīng)用及一種牛奶中酪蛋白的檢測方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010177434.4
• 申請(qǐng)日: 2020-03-13
• 公開（公告）號(hào): CN113390836B
• 公開（公告）日: 2023-09-29
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳志俊;張麗霞;劉洋
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 吉林大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N21/64
• 分類號(hào): G01N21/64
• 代理公司: 北京方圓嘉禾知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11385
• 代理人: 朱玲艷

本發(fā)明提供了硫磺素T的應(yīng)用及一種牛奶中酪蛋白的檢測方法，涉及酪蛋白檢測技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明利用酪蛋白與硫黃素T結(jié)合后會(huì)限制硫黃素T的自由旋轉(zhuǎn)，從而產(chǎn)生熒光發(fā)射現(xiàn)象，進(jìn)而實(shí)現(xiàn)對(duì)酪蛋白的檢測。本發(fā)明將硫黃素T用于牛奶中酪蛋白的檢測，具有較高的靈敏度和選擇性，硫黃素T對(duì)酪蛋白的線性范圍在5～200μg/mL內(nèi)，并且檢測限達(dá)到0.15μg/mL(3σ)。將其應(yīng)用到實(shí)際樣品牛奶中酪蛋白的檢測，其回收率在92.9％到104.8％之間。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及酪蛋白檢測技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及硫磺素T的應(yīng)用及一種牛奶中酪蛋白的檢測方法。

背景技術(shù)

牛奶一直是人類蛋白質(zhì)攝入的重要來源之一，對(duì)人類具有重要意義。牛奶中含有多種營養(yǎng)成分，如蛋白質(zhì)、脂類、乳糖和維生素，其中，蛋白質(zhì)的含量最高，是評(píng)價(jià)牛奶品質(zhì)的重要因素之一。而蛋白質(zhì)中酪蛋白的含量占?80％以上，因此，酪蛋白含量的確定對(duì)于牛奶中蛋白質(zhì)含量的確定極為重要。

目前，蛋白質(zhì)的主要測定方法是凱氏定氮法，這種分析技術(shù)主要是通過測定氮的含量來確定蛋白質(zhì)的含量，致使一些非法分子往牛奶中添加尿素、三聚氰胺等對(duì)人體有害的物質(zhì)，因此，發(fā)明一種可以單純識(shí)別酪蛋白的超靈敏探針至關(guān)重要。如今，已經(jīng)被報(bào)道的一些分析技術(shù)，如酶聯(lián)免疫分析、色譜分析、聚集誘導(dǎo)發(fā)光、熱力學(xué)方法等，由于其復(fù)雜的操作流程，昂貴的分析儀器，復(fù)雜的前處理步驟等等而受到限制，因此，發(fā)明簡單、高效、超靈敏的檢測手段是目前亟需解決的問題。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供硫黃素T的應(yīng)用及一種牛奶中酪蛋白的檢測方法，將硫黃素T用于牛奶中酪蛋白的檢測，具有較高的靈敏度，且簡單、高效、實(shí)用性強(qiáng)。

為了實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供以下技術(shù)方案：

本發(fā)明提供了硫黃素T在檢測酪蛋白中的應(yīng)用。

本發(fā)明提供了一種牛奶中酪蛋白的檢測方法，包括以下步驟：

對(duì)牛奶中的酪蛋白進(jìn)行提取，得到含酪蛋白的提取物；

將所述提取物、PBS緩沖液和硫黃素T溶液混合，得到混合液；

對(duì)所述混合液進(jìn)行熒光測試，根據(jù)酪蛋白濃度與熒光強(qiáng)度的標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到牛奶中酪蛋白的含量。

優(yōu)選的，所述提取的方法包括：采用醋酸/醋酸鈉緩沖溶液調(diào)節(jié)牛奶的pH值為4.3，分離后得到含酪蛋白的提取物。

優(yōu)選的，所述熒光測試的激發(fā)波長為400～450nm。

優(yōu)選的，所述熒光測試的激發(fā)和發(fā)射狹縫獨(dú)立地為3～5mm。

優(yōu)選的，所述混合液中硫黃素T的濃度為10～100μM。

優(yōu)選的，所述熒光測試時(shí)混合液的用量為1mL。

優(yōu)選的，所述硫黃素T溶液的濃度為0.1～10mM，溶劑為水或PBS緩沖液。

優(yōu)選的，所述PBS緩沖液的pH值為7.2～7.4。

優(yōu)選的，將所述提取物、PBS緩沖液和硫黃素T溶液混合的過程包括：將所述提取物溶解到PBS緩沖液中，然后再和硫黃素T溶液混合。

本發(fā)明提供了硫黃素T在檢測酪蛋白中的應(yīng)用。硫黃素T與酪蛋白具有較強(qiáng)的結(jié)合能力，且結(jié)合后會(huì)引起酪蛋白的聚集，聚集后的酪蛋白會(huì)限制硫黃素T的自由旋轉(zhuǎn)，從而產(chǎn)生熒光發(fā)射現(xiàn)象，進(jìn)而實(shí)現(xiàn)對(duì)酪蛋白的檢測。

本發(fā)明將硫黃素T用于牛奶中酪蛋白的檢測，具有較高的靈敏度和選擇性，硫黃素T對(duì)酪蛋白的線性范圍在5～200μg/mL內(nèi)，并且檢測限達(dá)到?0.15μg/mL(3σ)。將其應(yīng)用到實(shí)際樣品牛奶中酪蛋白的檢測，其回收率在?92.9％到104.8％之間。

附圖說明