[發明專利]一種檢測SARS-CoV-2 IgM-IgG抗體總量的量子點微球免疫層析試紙條

在審

• 申請號: 202010177152.4
• 申請日: 2020-03-13
• 公開（公告）號: CN111426829A
• 公開（公告）日: 2020-07-17
• 發明（設計）人: 劉斐;王彬;單衍可;李寶杰;李嘉豪
• 申請（專利權）人: 南京農業大學
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/558;G01N33/543
• 代理公司: 南京天華專利代理有限責任公司 32218
• 代理人: 徐冬濤;李曉峰

1.一種檢測新型冠狀病毒IgM-IgG抗體總量的量子點微球免疫層析試紙條，其特征在于：該試紙條包括底板、樣品墊、結合墊、硝酸纖維素膜和吸水墊，所述的樣品墊、結合墊、硝酸纖維素膜和吸水墊依次首尾銜接粘貼在底板上，所述的結合墊上包被有新型冠狀病毒N蛋白-標記物和S蛋白-標記物，所述的硝酸纖維膜上依次設有包被新型冠狀病毒N蛋白和S蛋白混合物的檢測線和包被新型冠狀病毒N蛋白抗體和S蛋白抗體混合物的質控線。

2.根據權利要求1所述的試紙條，其特征在于：所述底板的材料為PVC或硬質不吸水的材料；所述樣品墊的材料為玻璃纖維、棉纖維、濾紙纖維或聚脂纖維；所述結合墊的材料為玻璃纖維或聚酯纖維；所述吸水墊的材料為吸水濾紙。

3.根據權利要求1所述的試紙條，其特征在于：所述的樣品墊、結合墊、硝酸纖維素膜和吸水墊依次以2-4mm的間距交互層疊首尾粘貼在底板上。

4.根據權利要求1所述的試紙條，其特征在于：所述的標記物為量子點微球、時間分辨熒光微球或者上轉換熒光微球；優選的所述量子點微球的粒徑范圍為50-200nm。

5.根據權利要求1所述的試紙條，其特征在于：所述的檢測線上N蛋白和S蛋白混合物的濃度為0.4-1mg/mL；所述的質控線上N蛋白抗體和S蛋白抗體混合物的濃度為0.3-1.5mg/mL；用于稀釋N蛋白和S蛋白混合物溶液或N蛋白抗體和S蛋白抗體混合物溶液的稀釋液為含3％-5％蔗糖的PBS緩沖液。

6.權利要求1～5中任意一項所述試紙條的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)制備N蛋白-標記物和S蛋白-標記物，噴涂在所述的結合墊上，干燥備用；

(2)制備設有包被N蛋白和S蛋白混合物檢測線和包被N蛋白抗體和S蛋白抗體混合物質控線的硝酸纖維素膜，干燥備用；

(3)制備樣品墊：預先用含有0.5％-5％BSA，0.2％-2％Tween-20的緩沖液處理，干燥備用；

(4)將制備好的結合墊、硝酸纖維素膜、樣品墊與吸水墊、底板組裝成試紙。

7.根據權利要求6所述試紙條的制備方法，其特征在于，以量子點微球為標記物，所述N蛋白-標記物和S蛋白-標記物的制備過程包括以下步驟：

a)量子點微球的活化：將量子點微球加入緩沖液中；加入EDC和NHS；在37℃搖床中恒溫孵育；再至離心機中離心，棄上清，加入緩沖液重懸；

b)量子點微球的偶聯：將步驟a)得到的量子點微球緩沖液，分為2管，分別加入新型冠狀病毒N蛋白和S蛋白，在37℃搖床中恒溫孵育；

c)量子點微球的封閉：將步驟b)得到的完成偶聯的量子點微球緩沖液中加入封閉液，在37℃搖床中恒溫孵育，棄上清，加入緩沖液重懸。

8.一種利用權利要求1所述的試紙條檢測新冠狀病毒抗體的方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)將新冠病毒的N和S蛋白的抗體滴加到權利要求1所述試紙條的樣品墊上，進行層析，然后利用熒光檢測儀測得樣品相應的熒光強度值，記為T值和C值；

(2)以抗體的對數為橫坐標，T/C為縱坐標，繪制標準曲線；

(3)取待檢樣品溶液，加入試紙條層析10-15min；

(4)肉眼或/和熒光檢測儀判定結果：

判定結果(肉眼)：在做好防護措施下，配合紫外激光發射器，在紫外光的照射下，試紙條的C線顯色，T線顯色時，結果判定為結果為陽性，T線的顏色越深，則陽性越強。

判定結果(熒光檢測儀)：將試紙條插入熒光檢測儀的試紙條插入槽口中，得到熒光強度的數值，帶入標準曲線后可定量判斷樣品的陽性有無及強弱水平。