[發(fā)明專利]一種利用鉤藤不定芽誘導四倍體植株的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010176997.1
• 申請日: 2020-03-13
• 公開（公告）號: CN111165358B
• 公開（公告）日: 2023-05-02
• 發(fā)明（設計）人: 冷燕
• 申請（專利權）人: 臨滄惠康中藥材資源開發(fā)有限公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 昆明祥和知識產權代理有限公司 53114
• 代理人: 和琳

1.一種利用鉤藤不定芽誘導四倍體植株的方法，其特征在于按以下步驟和方法進行：

1）不定芽的無菌培養(yǎng)：選擇健壯無病蟲害鉤藤幼嫩芽，經消毒后，接種于不定芽誘導培養(yǎng)基上，置于適宜環(huán)境下培養(yǎng)；

2）多倍體誘導：將培養(yǎng)出的無菌不定芽剪成單芽，置于多倍體誘導液中，在適宜環(huán)境下誘導；

3）嵌合體分離培養(yǎng)：將經誘導的嵌合體洗凈后，置于嵌合體分離培養(yǎng)培養(yǎng)基上，在適宜環(huán)境下培養(yǎng)；

4）四倍體篩選：嵌合體分離培養(yǎng)成帶莖葉植株后，根據(jù)形態(tài)學鑒定法，選葉片肥厚、莖增粗的嵌合體，以株為單位，取幼嫩葉，進行染色體鑒定；

5）四倍體擴增：將篩選出的純系四倍體，剪成單芽，接種于增殖培養(yǎng)基，在適宜環(huán)境下培養(yǎng)；

6）四倍體生根：將獲得的純系四倍體苗，接種于生根培養(yǎng)基，在適宜環(huán)境下培養(yǎng)；

其中：

步驟2）所述的多倍體誘導液為0.1~0.15%秋水仙素溶液，多倍體誘導方法為在23~27℃下無光照浸泡24~48h；

步驟3）所述的嵌合體分離培養(yǎng)培養(yǎng)基為MS+NAA?0.01~0.05?mg/L?+KT?2.0~4.0?mg/L+BA?1.0~2.0?mg/L，培養(yǎng)環(huán)境為溫度23~27℃，光照強度2000~3000lux，單日光照時間10h；

步驟5）所述的增殖培養(yǎng)基為MS+NAA?0.01~0.05?mg/L?+KT?2.0~4.0?mg/L?+BA?1.0~2.0?mg/L，培養(yǎng)環(huán)境為溫度23~27℃，光照強度2000~3000lux，單日光照時間10h。

2.根據(jù)權利要求1所述的一種利用鉤藤不定芽誘導四倍體植株的方法，其特征在于步驟1）所述的消毒方法依次為75%酒精15~20s，0.1%升汞溶液5~7min，不定芽誘導培養(yǎng)基為1/2MS+NAA?0.1~0.5mg/L+BA3.0~5.0mg/L，培養(yǎng)環(huán)境為溫度23~27℃，光照強度1000~2000lux，單日光照時間10h。

3.根據(jù)權利要求1所述的一種利用鉤藤不定芽誘導四倍體植株的方法，其特征在于步驟6）所述的生根培養(yǎng)基為1/2WPM+NAA?0.5~2.0mg/L?+IBA?0~2.0mg/L+活性炭?0.5~1.0g/L，培養(yǎng)環(huán)境為溫度23~27℃，光照強度3000~4000lux，單日光照時間12h。