[發(fā)明專利]一種宏基因組二代測序的建庫樣本的制備方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 202010176692.0 | 申請日： | 2020-03-13 |
| 公開（公告）號： | CN111471676A | 公開（公告）日： | 2020-07-31 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 梁志坤;李貽林;吳英松;李明;楊學(xué)習(xí);周俊華 | 申請（專利權(quán)）人： | 廣州市達瑞生物技術(shù)股份有限公司 |
| 主分類號： | C12N15/10 | 分類號： | C12N15/10;C12Q1/6806;C12Q1/6869;C40B50/06 |
| 代理公司： | 廣州粵高專利商標(biāo)代理有限公司 44102 | 代理人： | 段卉 |
| 地址： | 510160 廣東省廣州市黃埔區(qū)*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 宏基 二代 樣本 制備 方法 | ||
1.一種宏基因組二代測序的建庫樣本的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
采集樣本，并制備樣本溶液；
裂解樣本溶液中的宿主細(xì)胞，并消化樣本溶液釋放出的DNA，通過酶法和機械法進行破壁，得到樣本1；
對樣本溶液進行DNA酶消化，得到樣本2；
將樣本1和樣本2合并，提取總核酸；
總核酸分為兩部分：一部分去除rRNA，反轉(zhuǎn)錄為cDNA，與另一部分混合；
其中，裂解樣本溶液中的宿主細(xì)胞的方法為，樣本溶液與皂苷溶液混合，至皂苷的終質(zhì)量濃度為0.22％～2.2％，孵育10～60min，再加入NaCl反應(yīng)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，利用HL-SAN Buffer和HL-SAN消化樣本溶液釋放出的DNA，離心，棄上清，洗滌并重懸沉淀。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，使用溶菌酶和溶胞酶進行酶法破壁。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，破壁的具體方法為：向產(chǎn)物中加入溶菌酶和溶胞酶，37℃30min，之后加入鋯珠，用組織研磨均質(zhì)儀以6M/s速度破壁30s，之后12000g離心3min，取上清。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，使用DNase I Buffer和RecombinantDNase I進行DNA酶消化。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，使用FastSelectTM RNARemoval Kit去除rRNA。
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