[發明專利]黃芪甲苷在制備促進血管新生藥物中的應用

在審

• 申請號: 202010176674.2
• 申請日: 2020-03-13
• 公開（公告）號: CN111249293A
• 公開（公告）日: 2020-06-09
• 發明（設計）人: 熊武;周忠志;彭阿建;朱芙蓉
• 申請（專利權）人: 湖南中醫藥大學第一附屬醫院（（中醫臨床研究所））
• 主分類號: A61K31/7048
• 分類號: A61K31/7048;A61P9/00
• 代理公司: 北京風雅頌專利代理有限公司 11403
• 代理人: 曾志鵬

1.黃芪甲苷(AS-IV)在制備促進血管新生藥物中的應用。

2.如權利要求1所述黃芪甲苷在制備促進血管新生藥物中的應用，其特征在于，所述的促進血管新生是通過促進人內皮祖細胞(EPCs)分泌外泌體(Exos)和血管生長因子實現的。

3.如權利要求2所述黃芪甲苷在制備促進血管新生藥物中的應用，其特征在于，所述黃芪甲苷促進人EPCs分泌外泌體和血管生長因子的方法包括：

S1、從細胞庫中選取P3-P6代的人內皮祖細胞復蘇，將復蘇后的EPCs培養于包被有人纖維連接蛋白的培養板，采用M199培養基預培養EPCs 24h；

S2、取貼壁細胞，用消化酶消化離心后重懸，待EPCs再次貼壁后，用磷酸鹽緩沖液(PBS)清洗細胞后，采用含有人血清替代物的去胎牛血清(FBS)的EGM-2MV培養基培養，加入黃芪甲苷與EPCs進行聯合培養48h；

S3、收集細胞培養上清液，先離心l0min去除殘存細胞，再離心20min以去除細胞碎片；

S4、收集離心后的細胞上清液，濃縮得到富含人內皮祖細胞外泌體(EPC-Exos)和血管生長因子的細胞懸液。

4.如權利要求3所述黃芪甲苷在制備促進血管新生藥物中的應用，其特征在于，所述步驟S2中黃芪甲苷的濃度為100～400mg/L。

5.如權利要求3所述黃芪甲苷在制備促進血管新生藥物中的應用，其特征在于，所述步驟S2中黃芪甲苷的濃度為100mg/L。

6.如權利要求3所述黃芪甲苷在制備促進血管新生藥物中的應用，其特征在于，步驟S1中M199培養基含20％胎牛血清、血管內皮生長因子(VEGF)10mg/L、青霉素100kU/L和鏈霉素100kU/L。

7.如權利要求1或2所述黃芪甲苷在制備促進血管新生藥物中的應用，其特征在于，所述促進血管新生藥物為含人內皮祖細胞外泌體和血管生長因子的水凝膠。

8.根據權利要求7所述黃芪甲苷在制備促進血管新生藥物中的應用，其特征在于，所述水凝膠中人內皮祖細胞外泌體中負載有與血管新生相關的miR-126-3p、miR-126-5p、miR-21、miR-146a、miR-210、miR-155、miR-214，外泌體的粒徑為88.7-123.5nm，濃度為100-1000mg/ml。

9.根據權利要求7所述黃芪甲苷在制備促進血管新生藥物中的應用，其特征在于，所述血管生長因子包括VEGFa、VEGFb、VEGFc、FGF和Ang-1。

10.根據權利要求7所述黃芪甲苷在制備促進血管新生藥物中的應用，其特征在于，所述水凝膠還包括穩定劑、保濕劑、水凝膠基質、PH調節劑和等滲劑。