[發(fā)明專利]畢赤酵母宿主蛋白殘留的檢測試劑盒及其應用

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• 申請日: 2020-03-13
• 公開（公告）號: CN111426843A
• 公開（公告）日: 2020-07-17
• 發(fā)明（設計）人: 劉國良;唐爽;郭林峰;謝燦;馮艷;徐軍;李曉平;陳小鋒;李文佳
• 申請（專利權）人: 東莞市東陽光生物藥研發(fā)有限公司;廣東東陽光藥業(yè)有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/543
• 代理公司: 北京清亦華知識產(chǎn)權代理事務所(普通合伙) 11201
• 代理人: 肖陽

1.一種宿主蛋白殘留的檢測試劑盒，其特征在于，包括：

多克隆抗體以及任選的生物標記的多克隆抗體，所述多克隆抗體特異性識別所述宿主蛋白；

其中，所述多克隆抗體是通過如下方式獲得的：

利用抗原對第一待免疫動物進行主動免疫，以便獲得第一含有抗體的血清；

利用所述第一含有抗體的血清對第二待免疫動物進行被動免疫，以便獲得第二含有抗體的血清；

將含有第二抗體的血清進行純化處理，以便獲得第二抗體，所述多克隆抗體包括所述第二抗體。

2.根據(jù)權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，進一步包括將第一含有抗體的血清進行純化處理，以便獲得第一抗體；

將第一抗體與所述第二抗體混合，以便獲得所述多克隆抗體。

3.根據(jù)權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述抗原為細胞全蛋白HCPs，任選地，所述抗原為發(fā)酵工程菌HCPs，任選地，所述抗原為畢赤酵母HCPs，任選地，所述第一待免疫動物和/或第二待免疫動物為新西蘭大白兔。

4.根據(jù)權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，進行被動免疫前，進一步包括將所述第一含有抗體的血清進行稀釋處理，任選地，所述稀釋處理的倍數(shù)為2～4倍，優(yōu)選地，3倍。

5.根據(jù)權利要求1或2所述的試劑盒，其特征在于，當血清中抗體滴度至少達到50萬時，分別對第一含有抗體的血清和第二含有抗體的血清進行純化處理；

優(yōu)選地，血清中抗體滴度不超過400萬。

6.根據(jù)權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述抗原與所述第一待免疫動物個體的質(zhì)量比1:1～3:2。

7.根據(jù)權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述第一含有抗體的血清與所述第二待免疫動物個體的體積質(zhì)量比為1:20～1:90。

8.根據(jù)權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，進一步包括抗體稀釋液、樣品稀釋液、reagent A、reagent B或PBST溶液；

任選地，所述抗體稀釋液為碳酸鈉和碳酸氫鈉的水溶液，所述抗體稀釋液的pH為9.5～9.7；

任選地，所述樣品稀釋液為BSA的水溶液，所述樣品稀釋液的pH為7.2～7.4；

任選地，所述reagent A為Streptavidin；

任選地，所述reagent B為Biotin-HRP；

任選地，所述PBST溶液為PBS和吐溫-20的水溶液。

9.一種檢測待測樣品中畢赤酵母宿主蛋白殘留的方法，其特征在于，利用權利要求1～8任一項所述的試劑盒，對待測樣品按照預定操作進行孵育處理；

將孵育處理后的待測樣品進行酶標檢測，以便獲得吸光值；

基于所獲得的吸光值以及吸光值-蛋白濃度標準曲線，獲得所述待測樣品中的宿主蛋白殘留量。

10.根據(jù)權利要求9所述的方法，其特征在于，所述對待測樣品按照預定操作進行孵育處理包括：

(1)利用多克隆抗體對酶標板進行覆蓋處理；

(2)利用封閉液對覆蓋處理后的酶標板進行封閉處理；

(3)將待測樣品加入封閉處理后的酶標板中進行第一孵育處理；

(4)將第一孵育處理后的酶標板進行第一清洗處理；

(5)將生物素標記的多克隆抗體加入第一清洗處理后的酶標板進行第二孵育處理；

(6)將第二孵育處理后的酶標板進行第二清洗處理；

(7)將SABC-HRP工作液加入第二清洗處理后的酶標板進行第三孵育處理；

(8)將第三孵育處理后的酶標板進行第三清洗處理；

(9)將第三清洗處理產(chǎn)物進行顯色反應。