[發(fā)明專(zhuān)利]一種石蠟包埋三維懸浮細(xì)胞團(tuán)的免疫熒光染色方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010174436.8
• 申請(qǐng)日: 2020-03-13
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN111207987A
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-05-29
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 宋益哲;曹易照;歐鎮(zhèn)生;粱德?tīng)N;李景秋;劉靖;凌伊;王慧;陳小鋒;李文佳
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 東莞市東陽(yáng)光生物藥研發(fā)有限公司;廣東東陽(yáng)光藥業(yè)有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): G01N1/30
• 分類(lèi)號(hào): G01N1/30;G01N33/533
• 代理公司: 北京睿陽(yáng)聯(lián)合知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11758
• 代理人: 郭奧博;王瑩

1.一種石蠟包埋三維懸浮細(xì)胞團(tuán)的免疫熒光染色方法，其特征在于，包括如下步驟：對(duì)三維懸浮細(xì)胞團(tuán)進(jìn)行預(yù)處理后，浸入石蠟液中包埋切片，進(jìn)行抗原修復(fù)，再進(jìn)行免疫熒光染色。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述預(yù)處理包括依次進(jìn)行的：固定、脫水以及透明。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述固定采用3～5％甲醛溶液，在室溫固定0.5～1.5h。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述脫水依次采用濃度為65～75％、85～95％、100％的乙醇逐級(jí)進(jìn)行；

優(yōu)選地，所述脫水包括：將固定后的細(xì)胞團(tuán)在65～75％的乙醇中孵育4～6min，再在85～95％的乙醇中孵育至少一次，每次孵育4～6min，再在100％的乙醇中孵育至少一次，每次孵育4～6min。

5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述透明包括：將脫水后的細(xì)胞團(tuán)在二甲苯中進(jìn)行至少一次孵育，每次孵育時(shí)間4～6min。

6.根據(jù)權(quán)利要求1～5任意一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，切片后，將載有細(xì)胞團(tuán)的玻片烘干，然后脫蠟復(fù)水。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，所述烘干為在40～45℃下烘干8～16h。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述抗原修復(fù)采用的修復(fù)液為0.05～0.15M、pH8.8～9.2的EDTA溶液。

9.根據(jù)權(quán)利要求1或8所述的方法，其特征在于，所述抗原修復(fù)包括如下步驟：將載有細(xì)胞團(tuán)的玻片置于抗原修復(fù)液中，95～100℃加熱15～25min，再快速置于0～4℃冷卻5～15min。

10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述細(xì)胞團(tuán)是人胚胎干細(xì)胞細(xì)胞團(tuán)，或是由人胚胎干細(xì)胞分化所得細(xì)胞的細(xì)胞團(tuán)。