[發明專利]一種戈舍瑞林的片段法合成方法

有效

• 申請號: 202010173879.5
• 申請日: 2020-03-13
• 公開（公告）號: CN111233980B
• 公開（公告）日: 2023-08-01
• 發明（設計）人: 宋志春;楊凱;鄒正才;王晶;候蓓;張孝清
• 申請（專利權）人: 南京禮威生物醫藥有限公司
• 主分類號: C07K7/23
• 分類號: C07K7/23;C07K1/20;C07K1/06;C07K1/04;C07K1/02
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1.一種戈舍瑞林的合成方法，其特征在于，該方法采用如下工藝步驟：

(1)將Wang樹脂加入固相反應器中，與Fmoc-Tyr(tBu)-OH在縮合劑DIC/HOBt、HBTU/HOBt/DIEA或PyBop/HOBt/DIEA的作用下進行偶聯反應，然后進行Fomc脫保護基反應；按照戈舍瑞林多肽序列依次連接如下氨基酸Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Trp(Boc)-OH、Fmoc-His(Trt)-OH、Pyr-OH，得到片段[5-9]肽樹脂；切割樹脂即在裂解劑作用下裂解樹脂后得到片段一Pyr⁹-His⁸-Trp⁷-Ser⁶-Tyr⁵-OH；

(2)將MBHA氨基樹脂與對硝基氯甲酸苯酯、水合肼進行依次偶聯反應，縮合劑為PyBop/HOBt/DIEA，然后按照戈舍瑞林多肽序列依次連接如下氨基酸Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Arg(NO₂)-OH、Fmoc-Leu-OHNHNHCONH₂，得到片段[1-3]肽樹脂，切割樹脂即在裂解劑的作用下裂解樹脂后得到片段三Leu³-Arg²(NO₂)-Pro¹-NHNHCONH₂¹⁰；

(3)將2-氯三苯甲基樹脂加入固相反應器中與氨基酸Fmoc-D-Ser(tBu)-OH在縮合劑DIEA的作用下偶聯反應，然后進行Fmoc脫保護基反應，得到片段二接頭D-Ser⁴(tBu)-2-CTCResin；

(4)固相法將片段二接頭與片段一在縮合劑HATU/HOBt/DIEA的作用下偶聯，得到片段[4-9]肽樹脂，切割樹脂即在裂解劑的作用下裂解樹脂后得到片段二，所述的片段二結構式為：

Pyr⁹-His⁸-Trp⁷-Ser⁶-Tyr⁵-D-Ser⁴(tBu)-OH

(5)液相法將片段二與片段三在縮合劑HBTU/HOBt/DIEA或HATU/HOBt/DIEA的作用下偶聯，得到戈舍瑞林前體，所述的戈舍瑞林前體結構式為：

Pyr⁹-His⁸-Trp⁷-Ser⁶-Tyr⁵-D-Ser⁴(tBu)-Leu³-Arg²(NO₂)-Pro¹-NHNHCONH₂¹⁰

(6)將戈舍瑞林前體在還原劑的作用下進行還原反應得到戈舍瑞林粗品；

(7)將戈舍瑞林粗品經過純化、成鹽、凍干得到醋酸戈舍瑞林精肽；

所述步驟(1)或步驟(2)中采用的裂解劑為三氟乙酸混合溶液，裂解劑體積為肽樹脂質量的7～15倍；所述的三氟乙酸混合溶液為TFA、PhSMe、TIS和水的混合溶液或為TFA、EDT和水的混合溶液，體積比：TFA：PhSMe：TIS：水＝70～97：10～1：10～1：10～1，TFA：EDT：水＝90～95：1～5：1～5；步驟(4)中采用的裂解劑為三氟乙醇混合溶液，裂解劑體積為肽樹脂質量的7～15倍，所述的三氟乙醇混合溶液為TFE和DCM混合容易，體積比TFE：DCM＝25:75～85；

所述Wang樹脂取代度為0.4-1.5mmol/g，

MBHA氨基樹脂的取代度為0.4-1.0mmol/g，所述2-氯三苯甲基樹脂取代度為0.4-1.0mmol/g。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述各步驟反應中采用的溶劑選自DCM和/或DMF。