[發明專利]超高效液相色譜串聯質譜技術檢測血清中9種水溶性維生素的方法

在審

• 申請號: 202010172708.0
• 申請日: 2020-03-12
• 公開（公告）號: CN111398451A
• 公開（公告）日: 2020-07-10
• 發明（設計）人: 成曉亮;李美娟
• 申請（專利權）人: 南京品生醫學檢驗實驗室有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/14
• 代理公司: 南京思拓知識產權代理事務所(普通合伙) 32288
• 代理人: 呂鵬濤

本發明涉及一種超高效液相色譜串聯質譜技術檢測血清中9種水溶性維生素的方法，將血清樣本與所有待測物的混合內標溶液混合，樣本無需衍生化處理，前處理簡單，只需一步蛋白沉淀處理，樣本用量小，靈敏度高，特異性強，檢測種類較多，5分鐘之內可同時檢測9種水溶性維生素，可用于臨床上血清水溶性維生素的診斷及健康評估。

技術領域

本發明屬于血液檢測技術領域，具體涉及一種超高效液相色譜串聯質譜技術檢測血清中9種水溶性維生素的方法。

背景技術

水溶性維生素是能在水中溶解的一組維生素，常是輔酶或輔基的組成部分。主要包括 B族維生素和維生素C。其中，B族維生素包括維生素B1(Thiamine，VB1)、維生素B2(Riboflavin，VB2)、維生素B3(Nicotinamide，VB3)、維生素B5(Pantothenic acid， VB5)、維生素B6(Pyridoxic Acid，VB6)、維生素B7(Biotin，VB7)、維生素B12 (Cyanocobalamin，VB12)和5-甲基四氫葉酸(5-methyl tetrahydrofolic acid，5-MTHF)。

維生素B1即硫胺素，在糖代謝中起到重要作用。硫胺素缺乏會導致糖代謝障礙，使血液中丙酮酸和乳酸含量增多，影響神經組織供能，產生腳氣病。主要表現為肌肉虛弱、萎縮，小腿沉重、下肢水腫、心力衰竭等。維生素B2又叫核黃素，是體內許多重要輔酶類的組成成分，能促進生長發育，保護眼睛、皮膚的健康，缺乏會引起皮炎，口角炎，舌炎，唇裂癥，脂溢性皮炎，陰囊炎等。維生素B3又稱為煙酸，有助于促進消化系統健康，改善腸胃功能障礙和腹瀉；有助于降低血液中膽固醇和甘油三酯水平；醫學上還用于改善口腔炎，防止口臭。維生素B5又叫泛酸、抗壓維生素，因為它有助于腎上腺素的產生，從而有效緩解壓力和疲勞。泛酸與維生素C一起食用，還有助于保持肌膚活力，加快傷口愈合。維生素B6又叫吡哆素，在蛋白質的代謝過程中起調控作用，它有助于能量的產生，讓人感覺精力充沛，被稱為提神營養素。吡哆酸是維生素B6的主要代謝產物，是在肝臟醛氧化酶的作用下產生的。維生素B9又叫葉酸，是一種重要的維生素，它與B12一起有利于血紅細胞形成，減少貧血。孕婦缺乏葉酸會導致胎兒的脊柱裂和無腦畸形。此外，葉酸還有助于保持血液正常的同型半胱氨酸水平(衡量心臟病的重要指標)，減少心臟病的發生。5-甲基四氫葉酸是血清中葉酸的主要存在形式，為活性葉酸。維生素B12又叫鈷胺素，可以促進血紅細胞形成和再生，減少惡性貧血；可以消除煩躁，幫助集中注意力和增強記憶力；有助于兒童生長發育，增進食欲。

維生素C又叫L-抗壞血酸，是一種水溶性維生素，主要作用是提高免疫力，預防癌癥、心臟病、中風，保護牙齒和牙齦等。

目前，有關水溶性維生素的檢測方法有很多種，如微生物檢測法、ELISA、放射免疫分析，蛋白質結合或生物傳感器等方法。微生物檢測方法適用于檢測多種衍生物的總和(如總葉酸)，其它方法在代謝物的區分上存在相同的缺點。而液相色譜串聯質譜法 (LC-MS/MS)能夠區分開天然維生素及其代謝產物，靈敏度高，特異性強，非常適用于血清或血漿中多種水溶性維生素的檢測。但是，目前的LC-MS/MS技術檢測水溶性維生素時仍然存在諸多問題，如靈敏度不夠、前處理復雜和樣本用量大等。