[發(fā)明專利]一種無DMSO的冷凍保存液在干細胞凍存中的應用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010172535.2
• 申請日: 2020-03-12
• 公開（公告）號: CN111793110B
• 公開（公告）日: 2022-11-11
• 發(fā)明（設計）人: 喬杰;嚴杰;閆麗盈;李蓉;王健君;金晟琳
• 申請（專利權）人: 北京大學第三醫(yī)院（北京大學第三臨床醫(yī)學院）;中國科學院化學研究所
• 主分類號: C07K5/062
• 分類號: C07K5/062;C07K5/068;C07K5/078;C07K5/083;A01N1/02
• 代理公司: 北京知元同創(chuàng)知識產權代理事務所(普通合伙) 11535
• 代理人: 黃越;焦健

本發(fā)明公開了一種無DMSO的冷凍保存液在干細胞凍存中的應用。本發(fā)明的冷凍保存液以每100mL體積計，含有仿生控冰材料0.01?50.0g，多元醇5.0?30mL，水溶性糖1?30g，血清0?30mL，余量為緩沖液，所述仿生控冰材料選自PVA和/或氨基酸類仿生控冰材料。本發(fā)明的冷凍保存液不含有DMSO，在用于冷凍保存干細胞時，能達到與商業(yè)化冷凍保存液(含有15％DMSO)同等甚至更高的細胞、組織存活率和功能表達穩(wěn)定性，具有較高的保存效率。其中，既無DMSO也無血清的冷凍保存液，進一步解決了目前臨床普遍使用的商業(yè)化冷凍保存液因含有血清而造成的穩(wěn)定性差，可帶入寄生性生物污染物質等問題。本發(fā)明的冷凍保存液組成簡單，且原料來源方便，成本低廉。

本申請要求2019年4月9日向中國國家知識產權局提交的專利申請?zhí)枮?01910281978.2，發(fā)明名稱為“一種無DMSO的冷凍保存液及其制備方法”的在先申請，以及專利申請?zhí)枮?01910281986.7，發(fā)明名稱為“一種肽類化合物和含有該化合物的冷凍保存液”的在先申請的優(yōu)先權。上述兩件在先申請的全文通過引用的方式結合于本申請中。

技術領域

本發(fā)明屬于生物醫(yī)用材料技術領域，具體涉及一種無DMSO的冷凍保存液及其在干細胞凍存中的應用。

背景技術

冷凍保存技術自問世以來，成為自然科學領域不可缺少的研究方法之一，已被廣泛采用。隨著生活水平的提高和醫(yī)學技術的發(fā)展，人類生殖細胞(精子、卵母細胞)、性腺組織等的冷凍保存成為保存生育力的重要手段。另外，隨著世界人口老齡化加劇，對捐贈的可用于再生醫(yī)學和器官移植的人源性細胞、組織或器官的冷凍保存的需求也極速增加。因此，如何高效的冷凍保存珍貴的細胞、組織以及器官資源已成為生命科學領域的重要課題。

目前最常用的冷凍保存方法為玻璃化冷凍。玻璃化冷凍技術雖然在快速冷凍過程中可使細胞內外的液體直接成為玻璃態(tài)而避免了冷凍過程中因冰晶形成而導致的損傷。但是，在復溫過程中，現有的冷凍保存試劑不能有效的控制冰晶的生長，從而損害細胞。二甲基亞砜(DMSO)是體外細胞培養(yǎng)常用的助溶劑和滲透類細胞凍存保護劑，然而，DMSO在臨床患者試驗時產生不良副作用；同時DMSO還具有強的細胞毒性，且不同種類的細胞對于DMSO濃度的敏感性不同，導致DMSO為主要保護劑成分的凍存試劑對細胞的毒副作用，其應用受到限制。目前玻璃化冷凍方法通常使用的高濃度(≥15％)的DMSO，嚴重影響冷凍保存對象復蘇后的存活率甚至(子代)安全性以及功能表達。綜上，目前采用的冷凍保存試劑不具備復溫過程中有效控制冰晶生長的能力，同時存在試劑毒性大的問題。

發(fā)明內容

為改善現有技術的上述缺陷，本發(fā)明提供一種無DMSO的冷凍保存液及其制備方法和應用。

本發(fā)明提供如下技術方案:

一種無DMSO的冷凍保存液，以每100mL體積計，含有仿生控冰材料0.01-50.0g，多元醇5.0-45mL，水溶性糖0.1-1mol L^-1，血清0-30mL，余量為緩沖液，所述仿生控冰材料選自聚乙烯醇PVA和/或氨基酸類仿生控冰材料。所述冷凍保存液中不含有二甲基亞砜(DMSO)。

根據本發(fā)明，所述氨基酸類仿生控冰材料選自聚氨基酸(聚合度≥2，優(yōu)選聚合度為2～40，例如聚合度為6、8、15、20等)、氨基酸、肽類化合物中的一種或兩種以上。

根據本發(fā)明，所述肽類化合物為多肽(優(yōu)選2-8個氨基酸組成的肽，例如2肽、3肽、4肽)、糖肽衍生物、式(I)所示化合物，