[發明專利]超高效液相色譜串聯質譜技術檢測尿液中8種兒茶酚胺及其代謝物的方法

在審

• 申請號: 202010172193.4
• 申請日: 2020-03-12
• 公開（公告）號: CN111398448A
• 公開（公告）日: 2020-07-10
• 發明（設計）人: 成曉亮;李美娟
• 申請（專利權）人: 南京品生醫學檢驗實驗室有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/38
• 代理公司: 南京思拓知識產權代理事務所(普通合伙) 32288
• 代理人: 呂鵬濤

本發明涉及一種超高效液相色譜串聯質譜技術檢測尿液中8種兒茶酚胺及其代謝物的方法，先利用超高效液相色譜將待測物與尿液基質分離，再利用質譜同位素內標定量法，以標準品與內標物的濃度比為X軸，標準品與內標物的峰面積比為Y軸，建立校準曲線，計算上述8種兒茶酚胺及其代謝物的含量。本發明的檢測方法，前處理過程簡單，不需要固相萃取或衍生化反應，成本低，且靈敏度高、特異性強，前處理10min內完成，4.5min之內完成8種兒茶酚胺及其代謝物的分離和檢測，基質效應與精密度基本滿足要求。

技術領域

本發明屬于尿液檢測技術領域，具體涉及一種超高效液相色譜串聯質譜技術檢測尿液中8種兒茶酚胺及其代謝物的方法。

背景技術

腎上腺素(Epinephrine，E)、去甲腎上腺素(Norepinephrine，NE)和多巴胺(Dopamine，DA)是酪氨酸在酶的作用下轉化而來，這3種兒茶酚胺都是中樞神經系統的重要神經遞質，在血管張力、腸和支氣管平滑肌張力、心率和收縮力以及葡萄糖代謝等自我調節功能中發揮重要作用。3-甲氧基酪胺(3-Methoxytyramine，3MT)、變腎上腺素(Metanephrine，MN)和去甲變腎上腺素(Normetanephrine，NMN)分別是多巴胺、腎上腺素和去甲腎上腺素的代謝物。這些代謝物進一步代謝為香草扁桃酸(Vanillymandelic acid，VMA)和高香草酸(Homovanillic acid，HVA)。

嗜鉻細胞瘤是一種罕見的、但有潛在致命性的腎上腺髓質嗜鉻細胞瘤，它可引起高血壓、心悸、嚴重頭痛和出汗(“發作”)。嗜鉻細胞瘤患者也可能無癥狀，表現為持續性高血壓或偶然發現的腎上腺腫塊。嗜鉻細胞瘤和其他來源于神經嵴細胞(如副神經節瘤和神經母細胞瘤)的腫瘤分泌兒茶酚胺(腎上腺素、去甲腎上腺素和多巴胺)。嗜鉻細胞瘤細胞也有能力將甲基化的兒茶酚胺轉化為分泌到血液循環中的變腎上腺素。在神經母細胞瘤和相關腫瘤(神經節神經母細胞瘤和神經節神經瘤)患者中，也可以觀察到1種或幾種兒茶酚胺水平的升高，偶爾在其他神經外胚層腫瘤中也可以觀察到。在高度懷疑嗜鉻細胞瘤的患者中，最好通過測量血漿兒茶酚胺來進行篩選。24小時尿兒茶酚胺可作為低可疑病例的首次檢測，也可作為血漿兒茶酚胺升高不到2倍的患者的驗證性研究。這是非常可取的，因為嗜鉻細胞瘤人群發病率較低(每年小于1:100,000人)，檢測24h尿液兒茶酚胺能避免大量患者接受不必要的、昂貴的、有時是危險的成像過程。

目前關于尿兒茶酚胺及其代謝物的檢測種類基本在3～5種，而且前處理使用固相萃取，不僅前處理復雜，而且成本高。人體兒茶酚胺及其代謝物的升高或者降低與嗜鉻細胞瘤、成交感神經瘤、特發性高血壓、神經母細胞瘤等疾病有很大相關性，對于這些疾病的診斷具體有重要參考價值，因此開發能一同檢測8種尿兒茶酚胺及其代謝物的方法更具有經濟和應用價值。

發明內容

本發明的目的是在現有技術的基礎上，提供一種超高效液相色譜串聯質譜技術檢測尿液中8種兒茶酚胺及其代謝物的方法。

本發明的技術方案如下：

一種超高效液相色譜串聯質譜技術檢測尿液中8種兒茶酚胺及其代謝物的方法，

所述8種兒茶酚胺及其代謝物分別為：腎上腺素(E)、去甲腎上腺素(NE)、多巴胺(DA)、變腎上腺素(MN)、去甲變腎上腺素(NMN)、3-甲氧酪胺(3-MT)、高香草酸(HVA)和香草扁桃酸(VMA)；

上述8種兒茶酚胺及其代謝物對應的內標物分別為：腎上腺素-d3(E-d3)、去甲腎上腺素-d6(NE-d6)、多巴胺-d4(DA-d4)、變腎上腺素-d3(MN-d3)、去甲變腎上腺素-d3(NMN-d3)、3-甲氧酪胺-d4(3-MT-d4)、高香草酸-d3(HVA-d3)和香草扁桃酸-d3(VMA-d3)；