[發明專利]一種具有pH廣泛穩定性的適冷褐藻膠裂解酶AlgL2及其應用

在審

• 申請號: 202010170519.X
• 申請日: 2020-03-12
• 公開（公告）號: CN111218439A
• 公開（公告）日: 2020-06-02
• 發明（設計）人: 王海英;王致鵬;紀曉峰
• 申請（專利權）人: 中國水產科學研究院黃海水產研究所
• 主分類號: C12N9/88
• 分類號: C12N9/88;C12N15/60;C12N15/81;C12N1/19;C12N9/42;C12P19/14;C12R1/84
• 代理公司: 北京科家知識產權代理事務所(普通合伙) 11427
• 代理人: 梁正賢

本發明涉及一種具有廣泛pH穩定性的適冷褐藻膠裂解酶AlgL2及其應用。屬于生物工程技術領域，該酶最適反應溫度為30℃，最適反應pH為9，且pH廣泛穩定，在pH4.0?11.0范圍內酶活保留率都高達70％。該酶降解方式為內切，是偏PolyG型褐藻膠降解酶，降解主產物為單糖至六糖。利用基因工程的技術方法獲得發酵液酶活力高達19.09U/mL，具有工業化生產的潛質。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種具有pH廣泛穩定性的適冷褐藻膠裂解酶AlgL2及其應用。

背景技術

褐藻膠是由互為差向異構體的β-D-古羅糖醛酸和α-L-甘露糖醛酸通過1,4糖苷鍵連接而成的線性多糖，是褐藻多糖的主要成分，約占褐藻干重的30％左右。褐藻膠廣泛應用在食品、印染、醫藥等領域。然而，由于褐藻膠聚合度高，相對分子量大，機體吸收利用度差，在一定程度上限制了應用。由褐藻膠降解獲得的褐藻寡糖一般為2～10聚合度，功能活性和應用價值比多糖更高。據報道，褐藻寡糖具有抗凝血，降血脂，促進細胞生長，抗自由基，抗病毒，坑腫瘤等多種功能，并能提高動物免疫力，促進植物生長，誘導植物抗逆性，在醫藥、食品保健、飼料添加劑、肥料等領域應用更廣。

褐藻膠主要通過三種方法降解為褐藻寡糖：化學降解法(酸解法、堿解法和氧化法)、物理降解法(輻射法)和生物降解法(微生物發酵和酶法)。酶解法降解褐藻膠反應條件溫和、過程易于控制，產物特異性強，且綠色環保。用酶法降解褐藻膠取代傳統的物理法、化學法已成趨勢，褐藻膠裂解酶作為降解褐藻膠的工具酶，對它的研究具有實際價值。目前尚無高效且廉價的商品化褐藻膠裂解酶，因此尋找不同來源及不同類型的褐藻膠裂解酶在海洋資源的開發利用及水產養殖研究中具有重要價值，已成為當前研究的新熱點。

發明內容

本發明提供了一種具有廣泛pH穩定性的適冷褐藻膠裂解酶AlgL2及其應用。該酶最適反應溫度為30℃，最適反應pH為9，且pH廣泛穩定，在pH4.0-11.0范圍內酶活保留率都高達70％。。該酶降解方式為內切，是偏PolyG型褐藻膠降解酶，降解主產物為單糖至六糖。

本發明提供一種褐藻膠裂解酶AlgL2,其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

SEQ ID NO.1:

QQAYPVPADKFDMMNWKITVPEDRDKNGKIDEIEGVAMFSYSNPDYFFLDDDGNMVFQVQNKAITTSGSSNARSELRQMLRGTDLTIDVKAPANNFAIAAHPNAKQYGAIGGKLSATLKVNHVATHANQPDKYPAYSVVVGQIHANKDPKLMETNSGFGYGNEPLKIFYKKWPGHTTGSVFWNYERNLEKDDPNRTDIAYPVWGNTWENKADPKEAGLALGEEFSYVVDVKGNIMHLTFTTKNHKTVEYKIDLSKNLTPSGEVDSKDNPHGYAGDSFYFKAGAYGQCSVKDDEGFWSPGCAGTGDFATDVKNGDYNSVSFSKLELSK

另一方面，本發明還提供一種褐藻膠裂解酶AlgL2對應的核苷酸序列，如SEQ IDNO.2所示。

SEQ ID NO.2: