[發(fā)明專利]一種用于生物制品殘留物檢測試劑盒

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010165479.X
• 申請日: 2020-03-11
• 公開（公告）號: CN111272993A
• 公開（公告）日: 2020-06-12
• 發(fā)明（設計）人: 李浪
• 申請（專利權）人: 賽秦（上海）生物技術有限公司
• 主分類號: G01N33/53
• 分類號: G01N33/53
• 代理公司: 上海微策知識產(chǎn)權代理事務所(普通合伙) 31333
• 代理人: 史玉婷

本發(fā)明涉及免疫學技術領域，具體涉及到一種用于生物制品殘留物檢測試劑盒。包括標準抗原、陰陽性對照液、抗CHO HCP、SPA、牛IgG蛋白抗體包被的酶標板、辣根過氧化物酶(HRP)標記的抗CHO HCP、牛IgG蛋白抗體溶液和輔助試劑。所述輔助試劑包括底物液A、底物液B和終止液；所述底物液B為四甲基聯(lián)苯胺的溶液；所述底物液A為過氧化氫脲的溶液。本發(fā)明提供的用于生物制品殘留物檢測試劑盒利用雙抗體夾心法ELISA對上述CHO HCP、SPA、牛IgG四種殘留物進行定量分析；操作時間短，技術人員短期培訓即能掌握檢測技術；能進行高通量檢測，進而有效提高質(zhì)控過程的效率；靈敏度高；成本低，無需使用昂貴的實驗設備，能極大的降低企業(yè)檢測成本。

技術領域

本發(fā)明涉及免疫學技術領域，具體涉及到一種用于生物制品殘留物檢測試劑盒。

背景技術

ELISA酶免法作為臨床檢測常用的方法，已延伸到許多學科領域，與以往的單純酶免技術相比，如今已發(fā)展衍生多種形式，使得檢測方法更具有省時省力，特異性強、靈敏度高等優(yōu)點。ELISA的基礎是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記。結合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學活性，酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學活性，又保留酶的活性。在測定時，受檢標本(測定其中的抗體或抗原)與固相載體表面的抗原或抗體起反應。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復合物與液體中的其它物質(zhì)分開。再加入酶標記的抗原或抗體，通過反應而結合在固相載體上。此時固相上酶量與標本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。加入酶反應的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標本中受檢物質(zhì)的量直接相關，故可根據(jù)呈色的深淺進行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，間接地放大了免疫反應的結果，使測定方法達到很高的敏感度。

目前國內(nèi)所有的利用真核表達或原核表達體系生產(chǎn)藥用重組蛋白的企業(yè)，及其他生產(chǎn)治療性抗體疫苗的生物醫(yī)藥企業(yè)，檢測殘留的非目標蛋白時使用的的都是進口檢測試劑盒。進口試劑盒價格較高，是制約質(zhì)控成本的關鍵因素之一。隨著中國人力資源成本的升高，抗體及藥物生產(chǎn)商必須盡量控制生產(chǎn)的成本，以追求利潤的最大化。節(jié)省開支的重要途徑之一，就是在保證產(chǎn)品質(zhì)量，且不對生產(chǎn)工藝的前提下盡可能的使用中國本土生產(chǎn)廠家所提供的設備及耗材。抗體及重組蛋白藥物的質(zhì)控過程，是一個與生產(chǎn)工藝緊密相連但又相對獨立的一個環(huán)節(jié)。改用國內(nèi)的質(zhì)控耗材，可以減少成本，但又不用對產(chǎn)品生產(chǎn)工藝大刀闊斧的改進。截至目前，2010版《中國藥典》僅對殘留的大腸桿菌和Vero細胞HCP有明確的規(guī)定檢測方法，對殘留的CHO HCP的檢測沒有明文的規(guī)定?！吨袊幍洹穼PA、牛IgG的殘留檢測也沒有規(guī)定。對BSA有嚴格的限定，不得超過50ng/劑量。因此，開發(fā)CHO HCP、SPA、牛IgG的殘留量檢測方法既能填補該領域的空白，也能為以后制定相關行業(yè)標準奠定基礎。

發(fā)明內(nèi)容

針對上述技術問題，本發(fā)明提供了一種用于生物制品殘留物檢測試劑盒，包括標準抗原、陰陽性對照液、抗CHO HCP、SPA、牛IgG蛋白抗體包被的酶標板、辣根過氧化物酶(HRP)標記的抗CHO HCP、牛IgG蛋白抗體溶液和輔助試劑。

作為一種優(yōu)選技術方案，所述辣根過氧化物酶(HRP)標記的抗CHO HCP、SPA、牛IgG蛋白抗體按1:2000稀釋使用。

作為一種優(yōu)選技術方案，所述輔助試劑包括底物液A、底物液B；所述底物液B為四甲基聯(lián)苯胺的溶液；所述底物液A為過氧化氫脲的溶液。

作為一種優(yōu)選技術方案，所述底物液B的制備方法包括如下步驟：四甲基聯(lián)苯胺陰陽性對照液20mg、無水乙醇8～10陰陽性對照液mL，加雙蒸水至1陰陽性對照液000mL，過濾除菌即得。

作為一種優(yōu)選技術方案，所述底物液A的制備發(fā)方法包括如下步驟：NaHPO14.60g、檸檬酸9.33g、過氧化氫脲0.52g，溶于三蒸水，終定容至1000mL，調(diào)至pH5.0～5.4即得。

作為一種優(yōu)選技術方案，所述終止液為硫酸溶液，其濃度為1mol/L。