[發明專利]一種磁微粒富集檢測生物醫學及環境標本新方法

在審

• 申請號: 202010162947.8
• 申請日: 2020-03-10
• 公開（公告）號: CN111308066A
• 公開（公告）日: 2020-06-19
• 發明（設計）人: 張金菊
• 申請（專利權）人: 北京國科融智生物技術有限公司
• 主分類號: G01N33/543
• 分類號: G01N33/543;C07K14/31;C12N15/70
• 代理公司: 北京愛普納杰專利代理事務所(特殊普通合伙) 11419
• 代理人: 王玉松;宋丹丹

本發明提供了一種磁微粒富集檢測生物醫學及環境標本新方法，該方法主要包括以下步驟：制備免疫磁珠：使用偶聯方法將磁小體與SPA偶聯，制得免疫磁珠；連接免疫磁珠和相應的抗體：將所述SPA的Bdomain與抗體非可變區FC端結合，制得結合抗體的免疫磁珠；富集：將生物醫學及環境標本與連接相應的抗體的磁珠混合，富集與抗體對應的抗原；本發明提供的方法對生物醫學及環境標本中抗原的富集效果好，優于合成磁珠。

技術領域

本發明屬于醫藥技術領域，特別涉及一種磁微粒富集檢測生物醫學及環境標本新方法。

背景技術

隨著人口數量和密度的增加，大規模爆發流行性傳染病(瘟疫)的風險日益增加，近年，SARS、禽流感、新冠肺炎在我國的爆發，都體現了這種嚴峻的趨勢，空氣傳播是流行性疾病最主要的傳播途徑，盡早、迅速、準確、簡便、低成本、高通量地確診感染者，是控制瘟疫爆發的關鍵，然而，要做到這一點卻并非易事，在2019年新冠肺炎的疫情中，我們可以看到如下問題：

①感染者的隱蔽性強：有不少感染者在早期沒有明顯癥狀，但依然具有較強的傳染性，他們進入人口聚集的區域后，往往會造成大范圍感染，如何發現并確診這類患者，目前還沒有一種有效的方法；

②醫院成了傳染源：有癥狀但未經確診的患者，在就醫時缺乏防護措施，從而造成病原體的大量傳播；

③醫護工作者缺乏：由于瘟疫突然爆發、疫情蔓延迅速，患者急劇增加，使得醫護工作者的數量嚴重不足；同時，在診療過程中，大量醫護工作者的感染，又加劇了這一狀況；

④醫療資源缺乏：由于患者數量暴增，原有的病房、醫療器械、防護裝備等資源嚴重不足；

⑤確診速度緩慢：對于新發現的病毒，由于還沒有相應的抗體，只能進行核酸檢測，而核酸檢測的靈敏度較低、假陰性比例高，有的病人甚至到第六次檢測才確定為陽性，大大延誤了確診時間；

⑥取樣部位尚未確定：新病毒在患者體內的分布規律還沒有完全掌握，因此很難做到準確取樣，而取樣部位的準確與否，直接關系到檢測結果的可靠性，雖然知道新冠病毒集中于肺部，但肺泡灌洗液操作復雜，需要特殊設備，很難進行高通量檢測；而咽拭子等方法雖然簡單、快速，但采集的病毒量小，依然有較高的假陰性比例。

發明內容

為了解決以上技術問題，本發明提供了一種磁微粒富集檢測生物醫學及環境標本新方法，該方法主要包括以下步驟：

制備免疫磁珠：使用偶聯方法將磁小體與SPA偶聯，制得免疫磁珠；

連接免疫磁珠和相應的抗體：將SPA的Bdomain與抗體非可變區FC端結合，制得結合抗體的免疫磁珠；

富集：將生物醫學及環境標本與連接相應的抗體的磁珠混合，富集與抗體對應的抗原。

進一步地，SPA為SPA重組蛋白，該SPA重組蛋白的序列如下：

GGATCC CGSGSGSADNKFNKEQQNAFYEILHLPNLTEEQRNAAIQSLKDDPSQSANLLAEAKKLNDAQAPKGSGSGSADNKFNKEQQNAFYEILHLPNLTEEQRNAAIQSLKDDPSQSANLLAEAKKLNDAQAPKAAGCTT。

進一步地，SPA重組蛋白是在對來自金黃色葡萄球菌Staphylococcus aureus的SPA基因的結構進行改造的基礎上進行的，重組蛋白的合成方法包括以下步驟：

(a)在天然SPA基因的B domain的N端添加一個半胱氨酸引入巰基；

(b)在引入巰基的SPA基因的兩端分別添加BamHⅠ與HindⅢ酶切位點；

(c)將步驟(b)的SPA基因克隆進入PET28(a+)載體，并轉化進入E·coli BL21內；