[發明專利]檢測樹鼩LCN2基因轉錄水平的引物、試劑盒及方法

在審

• 申請號: 202010162520.8
• 申請日: 2020-03-10
• 公開（公告）號: CN111187846A
• 公開（公告）日: 2020-05-22
• 發明（設計）人: 王陳蕓;唐東紅;葉尤松;李哲麗;李濤;徐瑾;董鑫;張銘娟;黃明峰
• 申請（專利權）人: 中國醫學科學院醫學生物學研究所
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12Q1/6851;C12N15/11
• 代理公司: 昆明正原專利商標代理有限公司 53100
• 代理人: 于洪;陳左

本發明涉及一種檢測樹鼩LCN2基因轉錄水平的引物、試劑盒及方法，屬于分子生物技術領域。檢測樹鼩LCN2基因轉錄水平的引物包括樹鼩LCN2基因表達水平的特異性上、下游引物和作為內參基因的樹鼩GAPDH基因的特異性上、下游引物。本發明以樣品總RNA反轉錄成的cDNA為模板，利用上述引物進行實時熒光定量PCR擴增，根據反應體系中熒光的變化情況定量LCN2基因轉錄水平。應用本發明所公開的引物序列可實現對樹鼩GAPDH基因及LCN2基因的特異性擴增，對材料中非目的基因沒有擴增信號，通過本發明的引物可對樹鼩LCN2基因轉錄水平的變化情況實施定量檢測，其操作簡單，可重復性高，特異性強，靈敏度好。

技術領域

本發明屬于分子生物技術領域，具體涉及一種檢測樹鼩LCN2基因轉錄水平的引物、試劑盒及方法，尤其涉及一種非診斷目的的用實時熒光定量RT-qPCR法檢測樹鼩LCN2基因轉錄水平的方法。

背景技術

LCN2(人脂質運載蛋白2)又稱中性粒細胞明膠酶相關脂質運載蛋白，是急性腎損傷的標志物，腎小管上皮細胞、中性粒細胞、肺泡巨噬細胞會少量分泌中性粒細胞明膠酶相關脂質運載蛋白。參與炎癥免疫應答，腎臟間質細胞向上皮細胞轉化過程受輸尿管芽分泌因子的調控，能實時監控腎損傷的發展過程，使診斷更具有特異性和敏感性。LCN2是BAT(棕色脂肪組織）活化的關鍵調節劑。它的缺乏導致體重增加，并損害適應性生熱作用。LCN2上調UCP1(解偶聯蛋白1)的表達，它介導BAT的產熱活性。值得注意的是，最初從嗜中性粒細胞中分離出來的LCN2與肥胖和脂肪細胞炎癥有關，因為核因子-κB（NF-κB）可以激活其表達。此外，LCN2被認為是一種鐵結合蛋白，可以誘導氧化應激。LCN2介導炎癥和氧化應激的調節中起重要作用。

目前對LCN2基因的研究主要集中在其蛋白功能及對蛋白的檢測分析上，對其轉錄水平的研究可以更深入的了解作用機制和調控機制。為研究樹鼩體內LCN2的轉錄水平，需建立一種能夠精確對LCN2 mRNA定量檢測的方法，為LCN2的進一步研究打下基礎。

發明內容

本發明的目的是為了解決現有技術的不足，提供一種檢測樹鼩LCN2基因轉錄水平的引物、試劑盒及方法，以在轉錄水平上對LCN2基因進行定量檢測。

為實現上述目的，本發明采用的技術方案如下：

檢測樹鼩LCN2基因轉錄水平的引物，包括樹鼩LCN2基因表達水平的特異性上、下游引物和作為內參基因的樹鼩GAPDH基因的特異性上、下游引物；

其中，樹鼩LCN2基因表達水平的特異性上、下游引物序列如下：

LCN2 F：5＇-ggaagtggtacaccgtaggc-3＇；

LCN2 R：5＇-gtagctgccgtcttcgttca-3＇；

作為內參基因的樹鼩GAPDH基因的特異性上、下游引物序列如下：

GAPDH F：5＇-agccccatcaccatcttcc-3＇；

GAPDH R：5＇-aatgagccccagccttctc-3＇。

本發明同時提供含有上述檢測樹鼩LCN2基因轉錄水平的引物的試劑盒。

本發明還提供上述引物或試劑盒在非診斷目的檢測樹鼩LCN2基因轉錄水平的應用。

本發明另外提供用于非診斷目的檢測樹鼩LCN2基因轉錄水平的方法，包括如下步驟：

步驟（1），分別以健康和待測樹鼩新鮮腎臟組織提取的總RNA為模板，逆轉錄合成得樹鼩腎臟組織cDNA第一鏈；