[發明專利]藻藍蛋白-二氫卟酚e6共價納米顆粒的制備及其應用

在審

• 申請號: 202010162261.9
• 申請日: 2020-03-10
• 公開（公告）號: CN111249461A
• 公開（公告）日: 2020-06-09
• 發明（設計）人: 黃劍東;祝登輝;林晨;張雅
• 申請（專利權）人: 福州大學
• 主分類號: A61K41/00
• 分類號: A61K41/00;A61K9/14;A61K47/64;A61P35/00
• 代理公司: 福州元創專利商標代理有限公司 35100
• 代理人: 修斯文;蔡學俊

本發明涉及一種藻藍蛋白?二氫卟酚e6共價納米顆粒的制備及其應用，屬于醫用功能材料技術領域，是先將二氫卟酚e6常溫活化，然后將活化后的二氫卟酚e6逐滴加入到PBS溶解的藻藍蛋白溶液中，反應一段時間。然后取出溶液離心、透析、凍干得到粉末。本發明通過藻藍蛋白靶向腫瘤細胞，采用激光為光源，在光敏劑富集于腫瘤后照射，能大大提高光動力治療中活性氧的產量，抑制腫瘤生長，療效增強顯著。

技術領域

本發明是關于一種用于腫瘤光動力治療的藻藍蛋白-二氫卟酚e6共價納米顆粒及其應用，具體而言，本發明是關于一種藻藍蛋白-二氫卟酚共價結合的試劑，其可用于腫瘤光動力治療方法，以藻藍蛋白為載體，增強光動力治療的效果，以應用于抑制腫瘤的生長。

背景技術

針對腫瘤的治療手段有很多，但目前最基本也是最主要的方法仍是手術、放療和化療。探索新的、毒副作用小的治療方法，或者在目前治療方法的基礎上增加一些輔助手段，進而提高療效、減輕毒副作用，是目前腫瘤治療亟待解決的問題。

近年來，光動力治療由于納米技術的發展引起了人們的廣泛關注。光動力治療，主要是將吲哚菁綠（ICG）、卟啉衍生物和二氫卟吩-e6（ce6）等光敏劑呈遞到腫瘤部位，在外部光源照射下，光敏劑能夠吸收光能，并將氧氣轉化為有細胞毒性的活性氧。該療法具有非侵入性、安全無毒和高效率等特點，隨著光纖技術的發展，從理論上說光動力療法可以發明內容應用于各種腫瘤的治療。現階段，大多數光敏劑和都存在水溶性差、生物相容性差等缺點，因此需要對其進行改造。

藻藍蛋白C-Phycocyanin（CPC） 是存在于藻類細胞中的光合輔助色素蛋白，有著良好的水溶性，在650 nm處有很強的的熒光發射，具有抗炎活性，抗癌功能，本課題組發現CPC對腫瘤相關巨噬細胞（TAM）具有靶向性。

二氫卟吩e6（簡稱Ce6）和Pc都是第二代光敏劑，在PDT抗腫瘤方面有著廣泛的應用。其中Ce6是被FDA所許可目前可應用于臨床的光敏劑，其結構簡單，在660 nm處有較強吸收，但是其水溶性差，不利于細胞攝取。目前也有許多學者將其制備成納米粒子來改善其性能。

發明內容

本發明主要是對腫瘤光動力療法進行研究，提供一種相關的治療試劑及其制備方法與應用，以增強光動力治療的效果。本發明選取了藻藍蛋白作為藥物載體，同市售可用于臨床的光敏劑Ce6和4種合成的Pc進行酰胺化反應，得到共價復合物，對其進行表征，研究其物理化學性質，在離體活性中研究了其TAM靶向性和離體PDT活性，最后研究共價復合物的在體生物活性。所得的藻藍蛋白-二氫卟酚e6共價納米顆粒在光動力抗腫瘤中表現出良好的靶向性、光動力活性和抗腫瘤活性，且性能穩定、生物毒性小。

一種藻藍蛋白-二氫卟酚e6共價納米顆粒的制備方法，具體操作步驟如下：

（1）活化二氫卟酚e6

稱取一定量的Ce6、N-羥基琥珀酰亞胺、1-乙基-3-(3-二甲基丙胺)碳二亞胺加入到DMSO溶液中，超聲使其充分溶解，于常溫避光攪拌活化一段時間，得到Ce6衍生物；

（2）配制藻藍蛋白溶液

按照Ce6:藻藍蛋白不同摩爾比的分別稱取若干藻藍蛋白溶解于PBS中，超聲使其充分溶解，離心，取上清液測電子吸收光譜，定量藻藍蛋白的濃度；

（3）制備藻藍蛋白-二氫卟酚e6溶液；

取出活化的Ce6衍生物，加到攪拌中的藻藍蛋白溶液中，反應過夜；

（4）制備藻藍蛋白-二氫卟酚e6粉末；

取出反應后溶液，離心，取上清液在水中透析，除去游離的Ce6、N-羥基琥珀酰亞胺、1-乙基-3-(3-二甲基丙胺)碳二亞胺，取透析后的溶液冷凍，凍干，得到復合物粉末，于-20℃保存。