[發明專利]用于H-FABP定量檢測的試劑盒、H-FABP定量檢測的方法

在審

• 申請號: 202010161735.8
• 申請日: 2020-03-10
• 公開（公告）號: CN111289758A
• 公開（公告）日: 2020-06-16
• 發明（設計）人: 江運強
• 申請（專利權）人: 蘇州翊訊生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/58;G01N33/543
• 代理公司: 無錫市匯誠永信專利代理事務所(普通合伙) 32260
• 代理人: 許云峰

1.一種用于H-FABP定量檢測的試劑盒，其特征在于，包括至少一根試劑條，在每根所述試劑條上包含有若干容納槽體，所述試劑盒還包括分別預存于不同的容納槽體中的磁微粒試劑、標記試劑和發光底物，所述磁微粒試劑由抗H-FABP一抗包被的磁珠制備得到，所述標記試劑由抗H-FABP二抗和堿性磷酸酶制備得到。

2.根據權利要求1所述的用于H-FABP定量檢測的試劑盒，其特征在于，所述磁微粒試劑按如下方法制備而來：

將抗H-FABP一抗和磁珠以及EDC混合并經充分孵育后,集磁去上清，加入封閉劑孵育后集磁去上清，再加入磁珠保存液后即制得磁微粒試劑半成品；

再將磁微粒試劑半成品分散于磁珠緩沖液中，即制備得到磁微粒試劑。

3.根據權利要求2所述的用于H-FABP定量檢測的試劑盒，其特征在于，所述磁珠為羧基磁珠，所述抗H-FABP一抗、所述磁珠和所述EDC的質量比為1-5:50-500:1-50，所述封閉劑為CE210。

4.根據權利要求2所述的用于H-FABP定量檢測的試劑盒，其特征在于，所述磁珠緩沖液的配方組分包括TRIS、NaCl、吐溫20、BSA和Proclin-300。

5.根據權利要求1所述的用于H-FABP定量檢測的試劑盒，其特征在于，所述標記試劑由經過活化的抗H-FABP二抗和經過活化的堿性磷酸酶混合，并經充分連接后制備得到。

6.根據權利要求5所述的用于H-FABP定量檢測的試劑盒，其特征在于，制備所述標記試劑的抗H-FABP二抗經2-IT溶液活化處理得到，制備所述標記試劑的堿性磷酸酶經過SMCC試劑活化處理得到。

7.根據權利要求6所述的用于H-FABP定量檢測的試劑盒，其特征在于，經活化后的抗H-FABP二抗和經活化后的堿性磷酸酶經充分連接反應后溶解于酶緩沖液中，所述酶緩沖液的配方組分包括TRIS、NaCl、吐溫20、MgCl₂、ZnCl₂、BSA和Proclin-300。

8.根據權利要求1-7中任一項所述的用于H-FABP定量檢測的試劑盒，其特征在于，還包括清洗液。

9.根據權利要求1-7中任一項所述的用于H-FABP定量檢測的試劑盒，其特征在于，還包括校準品。

10.一種H-FABP定量檢測的方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)制備磁微粒試劑：所述磁微粒為抗H-FABP一抗包被的磁微粒，將抗H-FABP一抗和磁珠以及EDC混合并經充分孵育后,集磁、去上清，加入封閉劑孵育后集磁去上清，再加入磁珠保存液后即制得磁微粒試劑半成品；

再將磁微粒試劑半成品分散于磁珠緩沖液中，即制備得到磁微粒試劑。

(2)制備標記試劑；

將經過活化的抗H-FABP二抗和經過活化的堿性磷酸酶混合，在二者充分連接后，終止反應，即制備得到標記試劑。

(3)校準品溶液配制：

將H-FABP抗原標準品使用校準品稀釋液分別配制濃度為5μg/ml和100μg/ml的A、B兩個校準品。

(4)標準曲線的繪制：

將步驟(1)制備得到的磁微粒試劑、步驟(2)制備得到的標記試劑以及堿性磷酸酶的發光底物的混合物分別與步驟(3)制備得到的A、B兩個校準品進行充分反應后進行發光值測定即制備得到H-FABP的濃度與發光值曲線。

(5)將待測樣品與步驟(1)制備得到的磁微粒試劑、步驟(2)制備得到的標記試劑以及堿性磷酸酶的發光底物進行充分反應后進行發光值測定，依據步驟(4)得到的標準曲線，即可得到待測樣品中H-FABP的含量。