[發(fā)明專利]一種抗心磷脂抗體IgG磁微粒化學發(fā)光免疫檢測試劑盒

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010161359.2
• 申請日: 2020-03-10
• 公開（公告）號: CN111323577B
• 公開（公告）日: 2022-05-03
• 發(fā)明（設計）人: 丁亞輝;李忠信;孫萌;王文強;于秀麗
• 申請（專利權(quán)）人: 鄭州安圖生物工程股份有限公司
• 主分類號: G01N33/543
• 分類號: G01N33/543;G01N21/76
• 代理公司: 北京集佳知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11227
• 代理人: 潘穎

本發(fā)明涉及醫(yī)學檢驗技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種抗心磷脂抗體IgG磁微粒化學發(fā)光免疫檢測試劑盒。該試劑盒包括磁微粒混懸液、酶結(jié)合物試劑、樣本稀釋液試劑和校準品；磁微粒混懸液由磁微粒?鏈霉親和素復合物和磁微粒緩沖液組成；酶結(jié)合物試劑由化學發(fā)光標記物標記的抗人IgG抗體和酶結(jié)合物稀釋液組成；樣本稀釋液試劑由生物素化心磷脂抗原溶液和樣本稀釋液組成；生物素化心磷脂抗原溶液為生物素化的β2?GP1抗原?心磷脂抗原溶液。本發(fā)明試劑盒采用生物素間接標記心磷脂抗原，可解決漏檢的難題，且檢測方法簡單、有效，可全自動操作，單人份測試，且試劑盒具備較佳的靈敏度、準確度、精密度和穩(wěn)定性。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及醫(yī)學檢驗技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種抗心磷脂抗體IgG磁微粒化學發(fā)光免疫檢測試劑盒。

背景技術(shù)

抗磷脂綜合征(antiphospholipid syndrome，APS)是一種由抗磷脂抗體(antiphospholipid-antibody,APL)介導的非器官特異的自身免疫病，臨床上以動脈、靜脈血栓形成、病態(tài)妊娠(妊娠早期流產(chǎn)和中晚期死胎)和血小板減少等癥狀為主要表現(xiàn)，同時伴隨中、高滴度APLs陽性。抗磷脂抗體(APL)是一組以磷脂或磷脂結(jié)合蛋白為靶抗原的自身抗體總稱。APLs通過識別并結(jié)合相關(guān)磷脂或磷脂結(jié)合蛋白來干擾各種依賴磷脂的凝血過程，如：影響血管內(nèi)皮細胞和血小板功能，促進磷脂依賴性凝血過程的發(fā)生，抑制抗凝物質(zhì)的作用(如β2-GP1、凝血酶原、蛋白C、蛋白S、繼發(fā)性抗凝血酶Ⅲ)，與胎盤抗凝蛋白結(jié)合，導致胎盤血栓形成及自發(fā)流產(chǎn)等。

抗心磷脂抗體(anticardiolipinantibodies,aCL)是一種以血小板和內(nèi)皮細胞膜上帶負電荷的心磷脂作為靶抗原的自身抗體。為抗磷脂抗體的一種，也是抗磷脂抗體綜合征(APS)的標志性抗體。抗心磷脂抗體的存在被認為是機體自身免疫反應的有力證據(jù)。aCL是一組特性不同的非均一性抗體，可分為IgG、IgM、IgA三種亞型。根據(jù)臨床病癥不同又可分為兩類：一類是非β2-GP1依賴型抗體，多見于感染性疾病；一類是β2-GP1依賴型抗體，多見于自身免疫性疾病。在2006年修訂的札幌標準中，實驗室陽性指標之一為IgG/M類抗心磷脂抗體陽性(滴度99的百分位數(shù))。此外，在第十三屆國際共識中，診斷APS推薦測定心磷脂抗體的IgG和IgM亞型，當兩者都為陰性，但仍然懷疑是APS患者時，推薦測定心磷脂抗體的IgA亞型。

臨床上檢測抗心磷脂抗體的方法主要為酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)和磁微粒化學發(fā)光法(CLIA)。其技術(shù)原理如下：

將心磷脂抗原(cL)，包被到96孔酶聯(lián)板或者磁微粒上，加入樣本，樣本中的抗心磷脂抗體IgG(aCL-IgG)與孔內(nèi)的心磷脂抗原(cL)發(fā)生特異性反應，使用清洗液洗去游離物質(zhì)，之后加入辣根過氧化物酶(HRP)/堿性磷酸酶(AP)或者吖啶酯(標記的兔/羊或者鼠抗人IgG抗體，形成心磷脂抗原-抗心磷脂抗體IgG-標記后的抗人IgG抗體的復合物，再次使用清洗液洗去游離物質(zhì)，加入底物，底物被催化或者直接發(fā)光，產(chǎn)物的量與標本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故可根據(jù)吸光或者發(fā)光值來進行定性或定量分析。

酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)存在著下述的不足之處：

(1)使用12×8型、6×8型、8×12型或整板型96孔專用微孔板作為抗原包被用具和反應容器，在使用時只能分成12批次、6批次、8批次或整板一次使用，無法進行獨立的、單人份的檢測；

(2)定量測定所用的試劑種類較多，每一種檢測試劑都要用試劑瓶來盛裝，并且每使用一種試劑時都需要更換吸液嘴來分別加注到微孔板的微孔中，不但試劑瓶種類多，加注試劑的操作也極為繁瑣；

(3)缺少對檢測信息的相應標注，只能通過查看試劑盒外包裝盒的標識才能了解或知悉檢測試劑的生產(chǎn)批號及有效期信息，而且所知悉的信息在檢測過程中不受控，具有很大的隨意性；

(4)檢測試劑在檢測過程中處于開放的空間，容易引起各種試劑之間的交叉污染而影響檢測結(jié)果的準確性；