[發明專利]一種檢測弓形蟲IgG抗體的酶聯免疫試劑盒及方法

有效

• 申請號: 202010160678.1
• 申請日: 2020-03-10
• 公開（公告）號: CN111273005B
• 公開（公告）日: 2021-08-17
• 發明（設計）人: 劉晶;凌慧芳;王先梅;劉群
• 申請（專利權）人: 中國農業大學
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 白艷

本發明公開了一種檢測弓形蟲IgG抗體的酶聯免疫試劑盒及方法。本發明提供的檢測弓形蟲的間接酶聯免疫試劑盒包括如下：抗原TgGRA54蛋白和包被液、或抗原TgGRA54蛋白溶液和包被液、或包被TgGRA54蛋白的酶標板；所述TgGRA54蛋白為如下a或b或c：a)序列表中序列2所示的蛋白質；b)序列表中序列2第35?416位氨基酸所示的蛋白質；c)將a)或b)所示的氨基酸序列經過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的由a)或b)衍生的蛋白質。本發明采用TgGRA54蛋白可用于臨床上大批量弓形蟲病的診斷，用其作為抗原制備間接酶聯免疫試劑盒，其檢測效果好，快速簡便，特異性好。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，尤其涉及一種檢測弓形蟲IgG抗體的酶聯免疫試劑盒及方法。

背景技術

弓形蟲在世界范圍內分布廣泛，是一種屬于頂復亞門孢子蟲綱真球蟲目的專性胞內原蟲，引起的弓形蟲病是危害人畜健康和經濟發展的人獸共患病之一。弓形蟲宿主種類十分廣泛，幾乎能感染所有的溫血動物和部分冷血動物。我國飼養的動物和寵物中，都存在一定的感染率。其中，動物弓形蟲感染中最常見的是豬，感染率為7.19％-75.95％，多數省份感染率在20％-40％，地區之間感染率差異較大。我國牛弓形蟲感染率為0％-52.50％，山羊弓形蟲感染率為1.4％-29.86％，可引起羊只流產或產弱羔及木乃伊胎。牛羊肉是中國人消費的主要肉品之一，因此，在牛和羊等牲畜的檢疫工作中，準確的檢疫和科學的處理可大大減少因弓形蟲病造成的人畜健康問題和經濟損失。

弓形蟲的感染沒有明顯的臨床癥狀，僅依靠發病癥狀的診斷并不可靠。目前診斷弓形蟲病的方法主要有病原學檢測、分子生物學檢測和血清學檢測。病原學診斷方法涉及到對蟲株的分離，試驗周期長，不適合用于大批量臨床樣本的檢測。分子生物學診斷方法一般依靠特定的核酸序列擴增和其它一些新興的技術，費用昂貴，不適合在臨床上推廣。血清學診斷方法具有準確、便捷、快速等優點，目前是臨床上常用的診斷方法。其中IFA一般認為是血清學診斷的金標準，ELISA方法相較于其它試驗檢測弓形蟲IgG抗體的敏感性和特異性較高，而且易于商品化和自動化，適合弓形蟲IgG抗體篩查，因此受到廣泛關注。

發明內容

本發明的一個目的是提供一種檢測弓形蟲的間接酶聯免疫試劑盒。

本發明提供的試劑盒，包括如下：

1)、抗原TgGRA54蛋白和包被液、或抗原TgGRA54蛋白溶液和包被液、或包被TgGRA54蛋白的酶標板；

所述TgGRA54蛋白為如下a或b或c：

a)序列表中序列2所示的蛋白質；

b)序列表中序列2第35-416位氨基酸所示的蛋白質；

c)將a)或b)所示的氨基酸序列經過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的由a)或b)衍生的蛋白質。

上述試劑盒中，所述抗原TgGRA54蛋白或所述抗原TgGRA54蛋白溶液的包被濃度為2.5μg/mL；

或所述包被TgGRA54蛋白的酶標板中每孔TgGRA54蛋白含量為0.25μg。

上述包被液為將抗原TgGRA54蛋白或抗原TgGRA54蛋白溶液稀釋為2.5μg/mL的包被濃度的溶液，具體采用Tris-HCl緩沖液。

上述試劑盒，還包括如下：

2)封閉液：體積百分含量為5％的馬血清溶液；

3)用于稀釋待測樣品或血清標準品的稀釋液；所述稀釋液為封閉液；

4)結合待測樣品的酶標二抗，在本發明的實施例中具體為HRP標記兔抗牛IgG抗體；

5)顯色液；