[發(fā)明專利]一種檢測(cè)弓形蟲(chóng)IgG抗體的酶聯(lián)免疫試劑盒及方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010160678.1
• 申請(qǐng)日: 2020-03-10
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN111273005B
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-08-17
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉晶;凌慧芳;王先梅;劉群
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N33/569
• 分類號(hào): G01N33/569
• 代理公司: 北京紀(jì)凱知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245
• 代理人: 白艷

1.一種檢測(cè)弓形蟲(chóng)的間接酶聯(lián)免疫試劑盒，包括如下組分：

1）、抗原TgGRA54蛋白和包被液、或抗原TgGRA54蛋白溶液和包被液、或包被TgGRA54蛋白的酶標(biāo)板；

所述TgGRA54蛋白為如下a或b：

a）序列表中序列2所示的蛋白質(zhì)；

b）序列表中序列2第35-416位氨基酸所示的蛋白質(zhì)。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于：

所述抗原TgGRA54蛋白或所述抗原TgGRA54蛋白溶液的包被濃度為2.5μg/mL；

或所述包被TgGRA54蛋白的酶標(biāo)板中每孔TgGRA54蛋白含量為0.25μg。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的試劑盒，其特征在于：所述包被液為T(mén)ris-HCl緩沖液。

4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的試劑盒，其特征在于：所述試劑盒還包括如下組分：

2）封閉液：體積百分含量為5%的馬血清溶液；

3）用于稀釋待測(cè)樣品的血清或血清標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋液；所述稀釋液為封閉液；

4）結(jié)合待測(cè)樣品的酶標(biāo)二抗；

5）顯色液；

6）弓形蟲(chóng)陽(yáng)性牛血清標(biāo)準(zhǔn)品和弓形蟲(chóng)陰性牛血清標(biāo)準(zhǔn)品。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的酶聯(lián)免疫試劑盒，其特征在于：

所述試劑盒還包括7）記載判斷標(biāo)準(zhǔn)的可讀載體；

所述判斷標(biāo)準(zhǔn)如下：若待測(cè)樣本OD450值≥0.306，則待測(cè)樣本含有或候選含有弓形蟲(chóng)抗體，若待測(cè)樣本OD450值小于0.306，則待測(cè)樣本不含有或候選不含有弓形蟲(chóng)抗體；

或，所述試劑盒還包括8）記載如下方法的可讀載體；

所述方法包括如下步驟：

1）包被：用Tris-HCl緩沖液將抗原TgGRA54蛋白溶液稀釋至2.5μg/mL，按照每孔100μL加入酶標(biāo)板中，包被；

2）封閉：加入5%馬血清溶液作為封閉液進(jìn)行封閉；

3）加待測(cè)樣品：將待測(cè)樣品的血清、弓形蟲(chóng)陽(yáng)性牛血清標(biāo)準(zhǔn)品和弓形蟲(chóng)陰性牛血清標(biāo)準(zhǔn)品分別用封閉液進(jìn)行1:200梯度稀釋；反應(yīng)；

4）加酶標(biāo)二抗：取結(jié)合待測(cè)樣品的血清的酶標(biāo)二抗用封閉液1:10000稀釋，加入酶標(biāo)板孔孵育；

5）顯色：將底物顯色液加入顯色；

6）終止：加入終止液；

7）讀數(shù)：在酶標(biāo)儀上讀出OD值；

若待測(cè)樣本OD450值≥0.306，則待測(cè)樣本含有或候選含有IgG抗體，

若待測(cè)樣本OD450值小于0.306，則待測(cè)樣本不含有或候選不含有IgG抗體。

6.制備權(quán)利要求4或5所述的酶聯(lián)免疫試劑盒的方法，其特征在于：將試劑盒中所述組分分別單獨(dú)包裝。

7.權(quán)利要求1中的抗原TgGRA54蛋白在如下1）-3）中至少一種中的應(yīng)用：

1）制備檢測(cè)或輔助檢測(cè)待測(cè)樣品中是否含有弓形蟲(chóng)IgG抗體產(chǎn)品中的應(yīng)用；

2）制備檢測(cè)或輔助檢測(cè)待測(cè)樣品是否感染弓形蟲(chóng)產(chǎn)品中的應(yīng)用；

3）制備診斷或輔助診斷弓形蟲(chóng)病產(chǎn)品中的應(yīng)用。

8.權(quán)利要求1-5中任一所述的酶聯(lián)免疫試劑盒在制備檢測(cè)或輔助檢測(cè)待測(cè)樣品中是否含有弓形蟲(chóng)IgG抗體產(chǎn)品中的應(yīng)用。