[發明專利]原代肝癌細胞培養基、原代肝癌細胞培養方法及其應用

有效

• 申請號: 202010160439.6
• 申請日: 2020-03-10
• 公開（公告）號: CN113373116B
• 公開（公告）日: 2023-03-14
• 發明（設計）人: 劉青松;趙明;陳程;王文超;任濤;王黎
• 申請（專利權）人: 合肥中科普瑞昇生物醫藥科技有限公司
• 主分類號: C12N5/09
• 分類號: C12N5/09;C12Q1/02
• 代理公司: 北京尚誠知識產權代理有限公司 11322
• 代理人: 龍淳;謝弘

本發明提供一種用于快速、穩定地培養原代肝癌細胞的原代肝癌細胞培養基和原代肝癌細胞培養方法。上述原代肝癌細胞培養基含有谷氨酰胺、非必需氨基酸、堿性成纖維細胞生長因子、肝細胞生長因子、IL?6、表皮生長因子、胰島素、Y27632、N2添加劑、B27添加劑、Primocin、青霉素和鏈霉素、胎牛血清、以及任選的氫化可的松、任選的R?spondin1。由本發明的原代肝癌細胞培養基以及本發明的原代肝癌細胞培養方法得到的細胞模型，能夠用于藥物的療效評估和篩選。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體而言，涉及用于在體外培養或擴增原代肝癌細胞的原代肝癌細胞培養基和原代肝癌細胞培養方法，還涉及培養得到的細胞在藥物的療效評估和篩選中的方法和應用。

背景技術

原代培養(primary culture)也叫初代培養，指直接從體內取出的腫瘤細胞或組織進行的第一次培養。最常用的原代培養有組織塊培養和分散細胞培養。組織塊培養是將剪碎的組織塊直接移植在培養瓶壁上，加入培養基后進行培養。分散細胞培養則是將組織塊用機械法或化學法使細胞分散。如欲從臨床活檢或切除的腫瘤組織分離到活性最好的游離細胞，經典的方法是用蛋白水解酶(如胰蛋白酶和膠原酶)消化細胞間的結合物，或用金屬離子螯合劑(如EDTA)除去細胞互相粘著所依賴的Ca²⁺，再經機械輕度振蕩，使之成為單細胞。

近幾年來，肝癌術后輔助化療作為一種新型輔助治療方式已逐漸得到臨床醫生的重視與認可，包括術后TACE治療，口服藥物治療等，但由于缺乏規范化療方案，常規憑經驗化療，忽略個體差異，帶有一定的盲目性，因此效果一直不佳，單藥及聯合用藥的有效率低于20％(Jindal A,Thadi A,Shailubhai K.Hepatocellular Carcinoma:Etiology andCurrent and Future Drugs[J].J Clin Exp Hepatol,2019,9(2):221-232)。新興的靶向藥物雖然在一定程度上降低了毒副作用，但是數量太少，治療費用昂貴，且有效率隨個體差異，難以滿足大多數患者的治療需求。主要是由于缺乏有效的肝癌藥敏試驗體系，如同細菌藥敏試驗一般，將把肝癌體外藥敏結果與臨床體內反應相對應，無法做到精準化療，因此研究對肝癌敏感藥物的開發就是治療關鍵。

高通量藥敏實驗技術(High-throuphput Drug Sensitivity)是一種新型藥敏檢測方法，具有檢測藥物覆蓋率廣，有效率高，個體化強等優點，已在白血病領域取得優異進展。對比其他類型藥敏實驗模型(PDO、PDX)同時也具有經濟，快速檢測，易于推廣等優點。而目前這一技術在肝癌領域所遇到的瓶頸主要是缺乏有效的、快速的、穩定的原代肝癌細胞培養擴增技術。

現已發現，使用滋養層細胞的條件性重編程培養法(conditional reprogrammingculture，CRC)可以快速穩定建立原代腫瘤細胞系(Xuefeng Liu,Ewa Krawczyk,etal.Conditional reprogramming and long-term expansion of normal and tumorcells from human biospecimens.Nature Protocols,VOl.12,NO.2,2017,439-451)。然而使用該文獻中記載的條件培養基(F Meduim)經過體外篩選的穩定細胞株培養周期較長，不能滿足臨床快速檢測的需求。因此，需要開發一種適用于原代肝癌細胞的快速穩定的培養基及培養方法，使得能夠在兩周以內進行高通量藥物篩選，有效指導臨床合理用藥。

發明內容

本發明旨在針對現有技術的不足，提供一種用于在體外快速、穩定地培養原代肝癌細胞的原代肝癌細胞培養基和原代肝癌細胞培養方法。采用本發明的原代肝癌細胞培養基、原代肝癌細胞培養方法構建原代肝癌細胞模型時，能夠獲得具有肝癌患者自身生物學特性的原代肝癌細胞，并能夠應用于新藥篩選和體外藥物敏感性檢測。