[發(fā)明專利]原代肝癌細胞培養(yǎng)基、原代肝癌細胞培養(yǎng)方法及其應用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010160439.6
• 申請日: 2020-03-10
• 公開（公告）號: CN113373116B
• 公開（公告）日: 2023-03-14
• 發(fā)明（設計）人: 劉青松;趙明;陳程;王文超;任濤;王黎
• 申請（專利權）人: 合肥中科普瑞昇生物醫(yī)藥科技有限公司
• 主分類號: C12N5/09
• 分類號: C12N5/09;C12Q1/02
• 代理公司: 北京尚誠知識產(chǎn)權代理有限公司 11322
• 代理人: 龍淳;謝弘

1.一種用于培養(yǎng)原代肝癌細胞的原代肝癌細胞培養(yǎng)基，其特征在于：

由初始培養(yǎng)基、谷氨酰胺、非必需氨基酸、堿性成纖維細胞生長因子、肝細胞生長因子、IL-6、表皮生長因子、胰島素、Y27632、N2添加劑、B27添加劑、Primocin、青霉素和鏈霉素、胎牛血清、氫化可的松和R-spondin1構成，

所述初始培養(yǎng)基選自DMEM/F12、DMEM、F12或RPMI-1640，

所述谷氨酰胺的含量為62.5ng/mL～1000ng/mL；

所述非必需氨基酸的總含量為0.25μM～4μM；

所述堿性成纖維細胞生長因子的含量為5ng/ml～80ng/ml；

所述肝細胞生長因子的含量為5ng/ml～80ng/ml；

所述IL-6的含量為1.25ng/ml～20ng/ml；

所述表皮生長因子的含量為2.5ng/ml～40ng/ml；

所述胰島素的含量為1.25ng/ml～20ng/ml；

所述Y27632的含量為5μM～40μM；

所述N2添加劑相對于培養(yǎng)基的體積比為1:25～1:400；

所述B27添加劑相對于培養(yǎng)基的體積比為1:12.5～1:200；

所述Primocin的含量為40μg/ml～80μg/ml；

所述青霉素的含量為80U/ml～200U/ml；

所述鏈霉素的含量為50μg/ml～150μg/ml；

所述胎牛血清相對于培養(yǎng)基的體積比為1:5～1:20；

所述氫化可的松的含量為0.4μg/ml～1.6μg/ml；

所述R-spondin1的含量為62.5ng/mL～1000ng/mL。

2.如權利要求1的原代肝癌細胞培養(yǎng)基，其特征在于：

所述谷氨酰胺的含量為125ng/mL～1000ng/mL；

所述非必需氨基酸的總含量為0.5μM～4μM；

所述堿性成纖維細胞生長因子的含量為20ng/ml～80ng/ml；

所述肝細胞生長因子的含量為20ng/ml～80ng/ml；

所述IL-6的含量為5ng/ml～20ng/ml；

所述表皮生長因子的含量為10ng/ml～40ng/ml；

所述胰島素的含量為2.5ng/ml～20ng/ml；

所述Y27632的含量為10μM～40μM；

所述N2添加劑相對于培養(yǎng)基的體積比為1:25～1:100；

所述B27添加劑相對于培養(yǎng)基的體積比為1:12.5～1:50。

3.如權利要求1或2的原代肝癌細胞培養(yǎng)基，其特征在于：

所述非必需氨基酸包含甘氨酸、丙氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、谷氨酸、脯氨酸和絲氨酸。

4.一種原代肝癌細胞的培養(yǎng)方法，其特征在于，包括以下步驟：

使用權利要求1～3中任一項所述的原代肝癌細胞培養(yǎng)基對原代肝癌細胞進行培養(yǎng)。

5.如權利要求4所述的培養(yǎng)方法，其特征在于：

在培養(yǎng)中，以5×10⁴～1.5×10⁵個/cm²的細胞密度加入經(jīng)輻照的滋養(yǎng)層細胞。

6.如權利要求5所述的培養(yǎng)方法，其特征在于：

所述經(jīng)輻照的滋養(yǎng)層細胞為小鼠的成纖維細胞。

7.如權利要求6所述的培養(yǎng)方法，其特征在于：

所述經(jīng)輻照的滋養(yǎng)層細胞為NIH-3T3或者J2-3T3。

8.如權利要求5所述的培養(yǎng)方法，其特征在于：

所述經(jīng)輻照的滋養(yǎng)層細胞經(jīng)γ射線或X射線照射。

9.如權利要求8所述的培養(yǎng)方法，其特征在于：

所述經(jīng)輻照的滋養(yǎng)層細胞經(jīng)γ射線照射。

10.如權利要求8所述的培養(yǎng)方法，其特征在于：

輻照劑量為10～50Gy。