[發明專利]一種利用微衛星鑒定和劃分湖羊家系的方法及其應用

有效

• 申請號: 202010159913.3
• 申請日: 2020-03-10
• 公開（公告）號: CN111004853B
• 公開（公告）日: 2021-01-05
• 發明（設計）人: 張莉;趙志達;王欣悅;胡文萍;侯浩賓
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院北京畜牧獸醫研究所
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12Q1/6858;C12N15/11;G16B20/30
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本發明公開了一種利用微衛星鑒定和劃分湖羊家系的方法及其應用，包括以下步驟：湖羊基因組DNA的提取；湖羊多態性微衛星標記的選擇與熒光基團修飾；降落式PCR擴增；分析基因型等數據，進行家系的鑒定與劃分等步驟。本發明選擇了多個微衛星位點，這些位點分布于多個常染色體，連鎖性低、等位基因數目多、多態性高、雜合度高，利用降落式PCR擴增，操作便捷、產物特異性強，可快速、準確地鑒定和劃分湖羊家系。累積單親排除率、父權排除率、雙親排除率分別達到99.6072%，99.8808%，99.9999%，完全能夠滿足遺傳育種中親子鑒定和系譜分析的要求，在湖羊家系選育和育種中有很大的應用價值。

技術領域

本發明涉及動物遺傳育種的分子標記技術領域，具體為一種利用微衛星鑒定和劃分湖羊家系的方法及其應用。

背景技術

湖羊是中國特有的綿羊品種，原產于浙江嘉興和太湖流域，具有早熟、常年發情、多胎、泌乳性能好、生長發育快、改良后產肉性能理想、適應性強等優良性狀，具有重要的經濟價值，是我國一級保護地方畜禽品種。近年來，養殖湖羊成為脫貧攻堅的重點項目，發展湖羊產業對我國畜牧業有著重要的意義。

在綿羊育種中，準確的系譜信息對估計遺傳參數、制定育種方案和避免近交衰退具有重要的意義。隨著湖羊優秀的潛能被逐漸發掘，其飼養規模逐年擴大，然而大部分湖羊養殖場仍存在引種難、飼養技術落后等問題，往往需要多年、多次、多場進行引種，導致種羊在入場時便存在親緣關系不清晰的問題。加上大多數管理人員育種理論薄弱，場內常發生近親交配、混精、登記不規范等現象，致使湖羊群體家系混亂，嚴重影響了湖羊的產品品質、產量和養殖效益。因此，開展湖羊家系鑒定和對系譜混亂的湖羊群體估計遺傳距離，重新劃分家系已成為湖羊產業可持續發展亟待解決的重要問題。

目前針對湖羊家系鑒定和劃分研究的報道甚少。微衛星標記具有多態性高、穩定性強、特異性高、共顯性遺傳等優點。微衛星分子標記技術已成為動植物親子關系鑒定最廣泛可靠的手段之一。眾多研究表明，微衛星標記在確認動物父母本和分析家系方面具有重要的應用價值。為進一步開展湖羊育種工作、挖掘湖羊品種潛力和保護湖羊品種資源，建立一種利用微衛星鑒定和劃分湖羊家系的方法及其應用具有重要的理論和生產意義。

發明內容

本發明旨在提供一種利用微衛星鑒定和劃分湖羊家系的方法及其應用，為湖羊分子育種提供必要的分子標記、熒光基團修飾組合方式、降落式PCR擴增方法。本方法具有準確率高、速度快、成本低、PCR產物穩定且特異性高等優點，主要是通過湖羊微衛星標記位點進行降落式PCR擴增和基因分型檢測來實現。

本發明的技術方案如下：

一種鑒定和劃分湖羊家系的方法及其應用的微衛星引物，所述引物為分布在多個常染色體上，等位基因數目多、多態性高、PCR產物穩定可靠的9對微衛星引物，參見圖1。

一種利用微衛星鑒定和劃分湖羊家系的方法及其應用，包括以下步驟：

（1）提取待測湖羊的DNA：對樣本湖羊頸靜脈采血1~2 mL，儲存在含EDTA采血管中待用，采用TIANGEN血液基因組DNA提取試劑盒提取待鑒別家系湖羊的DNA，作為模板待用；

（2）熒光基團修飾微衛星引物：選取9對微衛星引物，分成3組，其中BM3501、INRA023和MAF33為一組，TGLA137、HH64和FCB48為一組，MCM527、ETH152和VH72為一組，在每組引物的正向引物5’ 端分別用FAM、HEX、TAMRA三種不同的熒光基團進行修飾，用于降落式PCR；

（3）降落式PCR擴增：使用步驟（2）所述修飾后的9對引物，對步驟（1）獲得的DNA模板進行降落式PCR擴增，擴增產物以步驟（2）所述分組進行混合，混合物作為上機樣本；