[發明專利]一種利用微衛星鑒定和劃分湖羊家系的方法及其應用

有效

• 申請號: 202010159913.3
• 申請日: 2020-03-10
• 公開（公告）號: CN111004853B
• 公開（公告）日: 2021-01-05
• 發明（設計）人: 張莉;趙志達;王欣悅;胡文萍;侯浩賓
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院北京畜牧獸醫研究所
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12Q1/6858;C12N15/11;G16B20/30
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.用于鑒定和劃分湖羊家系的微衛星標記組合，其特征在于，由9個微衛星標記組成，所述9個微衛星標記的引物序列和熒光標記具體如下：

。

2.一種利用微衛星鑒定和劃分湖羊家系的方法，包括以下步驟：

（1）提取待測湖羊的DNA：對樣本湖羊頸靜脈采血1~2mL，儲存在含EDTA采血管中待用，采用TIANGEN血液基因組DNA提取試劑盒提取待鑒別家系湖羊的DNA，作為模板待用；

（2）熒光基團修飾微衛星引物：選取權利要求1中所述的9對微衛星引物，分成3組，其中BM3501、INRA023和MAF33為一組，TGLA137、HH64和FCB48為一組，MCM527、ETH152和VH72為一組，在每組引物的正向引物5’端分別用FAM、HEX、TAMRA三種不同的熒光基團進行修飾，用于降落式PCR；

（3）降落式PCR擴增：使用步驟（2）所述修飾后的9對引物，對步驟（1）獲得的DNA模板進行降落式PCR擴增，擴增產物以步驟（2）所述分組進行混合，混合物作為上機樣本；

（4）鑒定和劃分湖羊家系：對步驟（3）所述上機樣本采用基因分析儀進行分析，讀取每個樣本的基因型信息，用遺傳軟件計算個體之間的遺傳距離，根據遺傳距離繪制聚類圖，以此進行湖羊家系的鑒定與劃分。

3.根據權利要求2所述一種利用微衛星鑒定和劃分湖羊家系的方法，其特征在于，所述步驟（3）中降落式PCR擴增的反應體系為25μL，包括超純水10.5μL，2×Mix12.5μL，正反引物各0.5μL，DNA模板1μL。

4.根據權利要求2所述一種利用微衛星鑒定和劃分湖羊家系的方法，其特征在于，所述步驟（3）中降落式PCR擴增反應程序為：95℃預變性5min；95℃變性30s，64℃退火30s，72℃延伸40s，以后每個循環退火溫度依次降低1℃，直到58℃，共10個循環；之后95℃變性30s，58℃退火30s，72℃延伸40s，共25個循環；最后72℃延伸10min。

5.根據權利要求2所述一種利用微衛星鑒定和劃分湖羊家系的方法，其特征在于，所述步驟（4）中上機樣本在ABI3730XL基因分析儀上進行分型，以Rox-500為內參，使用GENEMAPPER4.0軟件讀取個體等位基因型，使用CERVUS3.0.7軟件分析待測湖羊基因型信息和個體間親緣關系，使用POPGENE1.32軟件計算個體間的Nei’s遺傳距離，以此構建UPGMA聚類圖，劃分家系。