[發(fā)明專利]miRNA-320a的表達促進物在制備抑制腫瘤細胞藥物中的應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010158454.7
• 申請日: 2020-03-09
• 公開（公告）號: CN111450249A
• 公開（公告）日: 2020-07-28
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 楊靜悅;王楠;李霄
• 申請（專利權(quán)）人: 楊靜悅
• 主分類號: A61K45/00
• 分類號: A61K45/00;A61P35/00;C12N5/077
• 代理公司: 北京知呱呱知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11577
• 代理人: 杜立軍

本發(fā)明實施例公開了miRNA?320a的表達促進物在制備抑制腫瘤細胞藥物中的應(yīng)用。肝癌腫瘤細胞中miRNA?320a的高表達促進物，通過在肝癌細胞中高表達miRNA?320a，可有效抑制肝癌細胞的前移以及繁殖，從而有效的治療肝癌。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明實施例涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種miRNA-320a的表達促 進物在制備抑制腫瘤細胞藥物中的應(yīng)用。

背景技術(shù)

肝癌即肝臟惡性腫瘤，可分為原發(fā)性和繼發(fā)性兩大類。原發(fā)性肝臟惡性 腫瘤起源于肝臟的上皮或間葉組織，前者稱為原發(fā)性肝癌，是危害極大的惡 性腫瘤；后者稱為肉瘤，與原發(fā)性肝癌相比較較為少見。繼發(fā)性或稱轉(zhuǎn)移性 肝癌系指全身多個器官起源的惡性腫瘤侵犯至肝臟。根據(jù)肝癌的不同階段酌 情進行個體化綜合治療，是提高療效的關(guān)鍵；治療方法包括手術(shù)、肝動脈結(jié) 扎、肝動脈化療栓塞、射頻、冷凍、激光、微波以及化療和放射治療等方 法。生物治療，中醫(yī)中藥治療肝癌也多有應(yīng)用。手術(shù)治療，手術(shù)是治療肝癌 的首選，也是最有效的方法。手術(shù)方法有：根治性肝切除，姑息性肝切除等。 對不能切除的肝癌可根據(jù)具體情況，采用術(shù)中肝動脈結(jié)扎、肝動脈化療栓塞、 射頻、冷凍、激光、微波等治療有一定的療效。對手術(shù)不能切除者，也可行 放射介入治療，經(jīng)股動脈作選擇性插管至肝動脈，注入栓塞劑(常用如碘化 油)和抗癌藥行化療栓塞，部分患者可因此獲得手術(shù)切除的機會。放射治療， 對一般情況較好，肝功能尚好，不伴有肝硬化，無黃疸、腹水、無脾功能亢進 和食管靜脈曲張，癌腫較局限，尚無遠處轉(zhuǎn)移而又不適于手術(shù)切除或手術(shù)后 復(fù)發(fā)者，可采用放射為主的綜合治療。而對于轉(zhuǎn)移性晚期肝癌患者，目前有靶 向(侖伐替尼)及免疫PD-1抗體(帕博利珠單抗)、化療等藥物治療，但整 體治療療效仍不盡如人意。

發(fā)明內(nèi)容

為此，本發(fā)明實施例提供miRNA-320a的表達促進物在制備抑制腫瘤細 胞藥物中的應(yīng)用，以解決現(xiàn)有技術(shù)中治療肝癌的藥物效果差，且副作用大的問 題。

為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明實施例提供如下技術(shù)方案：

miRNA-320a的表達促進物在制備抑制腫瘤細胞藥物中的應(yīng)用。

優(yōu)選的，其中，所述腫瘤細胞為肝癌細胞。

優(yōu)選的，其中，所述表達促進物為LncRNA-NEAT1、MALAT1、OIP5-AS1 或高表達miRNA-320a的載體。

優(yōu)選的，其中，所述高表達miRNA-320a的載體為過表達miRNA-320a的 腫瘤相關(guān)成纖維細胞的外泌體。

優(yōu)選的，其中，所述表達促進物為組合物，所述組合物包括所述過表達 miRNA-320a的腫瘤相關(guān)成纖維細胞的外泌體、FGK4.5、以及激動劑。

優(yōu)選的，其中，所述激動劑為TLR4激活劑LPS、TLR7激活劑Gardiquimod 以及TLR9激活劑CpG-ODN。

優(yōu)選的，其中，所述腫瘤相關(guān)成纖維細胞的外泌體的制備方法包括：

用PBS將肝組織洗凈后，粉碎成1mm³的小塊，加入含0.5％膠原酶Ⅳ、 1％FBS、1％青-鏈霉素的DMEM/F12培養(yǎng)基，37℃、5％CO₂培養(yǎng)箱孵育30 min；

待肝組織完全消化后收集細胞懸液，離心、棄上清，將細胞沉淀重懸于 原代成纖維細胞專用培養(yǎng)基；

將培養(yǎng)2～3代的原代成纖維細胞消化，計數(shù)后重懸于MACS緩沖液中， 加入抗人成纖維細胞磁珠后上柱，在免疫磁珠細胞分選儀中純化，得到純化后 的腫瘤相關(guān)成纖維細胞的外泌體；

所述純化后的腫瘤相關(guān)成纖維細胞的外泌體培養(yǎng)于含10％FBS的DMEM 培養(yǎng)基中，經(jīng)4～10代純化，得到腫瘤相關(guān)成纖維細胞的外泌體。