[發明專利]miRNA-320a的表達促進物在制備抑制腫瘤細胞藥物中的應用在審
| 申請號： | 202010158454.7 | 申請日： | 2020-03-09 |
| 公開（公告）號： | CN111450249A | 公開（公告）日： | 2020-07-28 |
| 發明（設計）人： | 楊靜悅;王楠;李霄 | 申請（專利權）人： | 楊靜悅 |
| 主分類號： | A61K45/00 | 分類號： | A61K45/00;A61P35/00;C12N5/077 |
| 代理公司： | 北京知呱呱知識產權代理有限公司 11577 | 代理人： | 杜立軍 |
| 地址： | 710032 *** | 國省代碼： | 陜西;61 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | mirna 320 表達 促進 制備 抑制 腫瘤 細胞 藥物 中的 應用 | ||
1.miRNA-320a的表達促進物在制備抑制腫瘤細胞藥物中的應用。
2.如權利要求1所述的應用，其中，所述腫瘤細胞為肝癌細胞。
3.如權利要求1所述的應用，其中，所述表達促進物為LncRNA-NEAT1、MALAT1、OIP5-AS1或高表達miRNA-320a的載體。
4.如權利要求3所述的應用，其中，所述高表達miRNA-320a的載體為過表達miRNA-320a的腫瘤相關成纖維細胞的外泌體。
5.如權利要求4所述的應用，其中，所述表達促進物為組合物，所述組合物包括所述過表達miRNA-320a的腫瘤相關成纖維細胞的外泌體、FGK4.5、以及激動劑。
6.如權利要求5所述的應用，其中，所述激動劑為TLR4激活劑LPS、TLR7激活劑Gardiquimod以及TLR9激活劑CpG-ODN。
7.如權利要求3所述的應用，其中，所述腫瘤相關成纖維細胞的外泌體的制備方法包括：
用PBS將肝組織洗凈后，粉碎成1mm3的小塊，加入含0.5％膠原酶Ⅳ、1％FBS、1％青-鏈霉素的DMEM/F12培養基，37℃、5％CO2培養箱孵育30min；
待肝組織完全消化后收集細胞懸液，離心、棄上清，將細胞沉淀重懸于原代成纖維細胞專用培養基；
將培養2～3代的原代成纖維細胞消化，計數后重懸于MACS緩沖液中，加入抗人成纖維細胞磁珠后上柱，在免疫磁珠細胞分選儀中純化，得到純化后的腫瘤相關成纖維細胞的外泌體；
所述純化后的腫瘤相關成纖維細胞的外泌體培養于含10％FBS的DMEM培養基中，經4～10代純化，得到腫瘤相關成纖維細胞的外泌體。
8.如權利要求7所述的應用，其中，所述原代成纖維細胞專用培養基為含有10％FBS、1％ITS細胞培養添加劑、1％青-鏈霉素、1％谷氨酰胺的DMEM/F12培養基。
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