[發(fā)明專利]一種基于混合抗原快速檢測(cè)新型冠狀病毒抗體試劑盒有效
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 202010156804.6 | 申請(qǐng)日： | 2020-03-09 |
| 公開（公告）號(hào)： | CN111239394B | 公開（公告）日： | 2021-05-18 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 楊正林;鐘凌;龔波;蔣黎;石毅;黃璐琳;龍騰鑲;劉東澤;徐雨;干盈盈 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 四川省醫(yī)學(xué)科學(xué)院·四川省人民醫(yī)院 |
| 主分類號(hào)： | G01N33/569 | 分類號(hào)： | G01N33/569;C12N15/50;C12N15/70;C12N15/85;C07K14/165 |
| 代理公司： | 成都行之專利代理事務(wù)所(普通合伙) 51220 | 代理人： | 胡曉麗 |
| 地址： | 610000 四*** | 國(guó)省代碼： | 四川;51 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說(shuō)明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 基于 混合 抗原 快速 檢測(cè) 新型 冠狀病毒 抗體 試劑盒 | ||
本發(fā)明公開了一種基于混合抗原快速檢測(cè)新型冠狀病毒抗體試劑盒，包括COVID?19核衣殼蛋白抗原膠體金和COVID?19纖突蛋白抗原膠體金。將該試劑盒用于用于診斷新型冠狀肺炎，操作簡(jiǎn)便，可直接將COVID?19核衣殼蛋白抗原膠體金和COVID?19纖突蛋白抗原膠體金混合作為整體進(jìn)行檢測(cè)，或者檢測(cè)時(shí)直接將COVID?19核衣殼蛋白抗原膠體金和COVID?19纖突蛋白抗原膠體金混合進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)靈敏度高，利于疫情的有效控制。
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明涉及肺炎檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種基于混合抗原快速檢測(cè)新型冠狀病毒抗體試劑盒，用于診斷新型冠狀肺炎。
背景技術(shù)
2019新型冠狀病毒(COVID-2019)，2020年1月12日被世界衛(wèi)生組織命名。冠狀病毒是一個(gè)大型病毒家族，已知可引起感冒以及中東呼吸綜合征(MERS)和嚴(yán)重急性呼吸綜合征(SARS)等較嚴(yán)重疾病。新型冠狀病毒是以前從未在人體中發(fā)現(xiàn)的冠狀病毒新毒株。
人感染了冠狀病毒后常見體征有呼吸道癥狀、發(fā)熱、咳嗽、氣促和呼吸困難等。在較嚴(yán)重病例中，感染可導(dǎo)致肺炎、嚴(yán)重急性呼吸綜合征、腎衰竭，甚至死亡。目前對(duì)于新型冠狀病毒所致疾病沒有特異治療方法。因此對(duì)于疾病的預(yù)防和早期診斷對(duì)于控制新型冠狀病毒疫情蔓延尤為重要。
發(fā)明內(nèi)容
針對(duì)上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明提供了解決上述問(wèn)題的一種基于混合抗原快速檢測(cè)新型冠狀病毒抗體試劑盒，用于快速、準(zhǔn)確地檢測(cè)新型冠狀肺炎。
本發(fā)明通過(guò)下述技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：
一種基于混合抗原快速檢測(cè)新型冠狀病毒抗體試劑盒，包括COVID-19核衣殼蛋白抗原膠體金和COVID-19纖突蛋白抗原膠體金。將該試劑盒用于診斷新型冠狀肺炎，操作簡(jiǎn)便，可直接將COVID-19核衣殼蛋白抗原膠體金和COVID-19纖突蛋白抗原膠體金混合作為整體進(jìn)行檢測(cè)，或者檢測(cè)時(shí)直接將COVID-19核衣殼蛋白抗原膠體金和COVID-19纖突蛋白抗原膠體金混合進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)靈敏度高，利于疫情的有效控制。
進(jìn)一步地，所述COVID-19核衣殼蛋白抗原膠體金和COVID-19纖突蛋白抗原膠體金的質(zhì)量配比為1:1。
進(jìn)一步地，所述COVID-19核衣殼蛋白抗原膠體金中包含的COVID-19核衣殼蛋白，所述COVID-19核衣殼蛋白是基于COVID-19核衣殼蛋白的全基因，經(jīng)表達(dá)純化獲得的融合蛋白；所述COVID-19纖突蛋白抗原膠體金中包含的COVID-19纖突蛋白，所述COVID-19纖突蛋白是基于S1蛋白Gln14-Arg685區(qū)域的基因，經(jīng)表達(dá)純化獲得的融合蛋白。
進(jìn)一步地，所述COVID-19核衣殼蛋白通過(guò)以下表達(dá)和純化方法制備獲得，包括以下步驟：
步驟1，全合成編碼核衣殼蛋白的基因，將核衣殼蛋白的基因克隆至原核表達(dá)載體，構(gòu)建N-His表達(dá)載體；
步驟2，將表達(dá)載體轉(zhuǎn)入感受態(tài)大腸桿菌中，誘導(dǎo)表達(dá)核衣殼蛋白；
步驟3，收集細(xì)胞，破碎細(xì)胞后離心獲得上清，分離純化N-His融合蛋白。
進(jìn)一步地，所述步驟1中，所述原核表達(dá)載體包括pET28a，核衣殼蛋白帶有His標(biāo)簽，構(gòu)建N-His表達(dá)載體。
進(jìn)一步地，所述步驟1中，克隆所采用的正向引物的核苷酸序列為：CAGTGTGTTAATCTTACAACC；反向引物的核苷酸序列為：ACGTGCCCGCCGAGGAGAATT。
進(jìn)一步地，所述COVID-19纖突蛋白通過(guò)以下表達(dá)和純化方法制備獲得，包括以下步驟：
步驟1，全合成編碼S1蛋白Gln14-Arg685區(qū)域的基因，將S1基因克隆至真核表達(dá)載體，構(gòu)成S1-mFc融合基因；
步驟2，將S1-mFc表達(dá)質(zhì)粒電轉(zhuǎn)到感受態(tài)大腸桿菌，挑取陽(yáng)性單克隆，擴(kuò)增后提取質(zhì)粒；
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