[發明專利]一種基于混合抗原快速檢測新型冠狀病毒抗體試劑盒

有效

• 申請號: 202010156804.6
• 申請日: 2020-03-09
• 公開（公告）號: CN111239394B
• 公開（公告）日: 2021-05-18
• 發明（設計）人: 楊正林;鐘凌;龔波;蔣黎;石毅;黃璐琳;龍騰鑲;劉東澤;徐雨;干盈盈
• 申請（專利權）人: 四川省醫學科學院·四川省人民醫院
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;C12N15/50;C12N15/70;C12N15/85;C07K14/165
• 代理公司: 成都行之專利代理事務所(普通合伙) 51220
• 代理人: 胡曉麗

1.一種基于混合抗原快速檢測新型冠狀病毒抗體試劑盒，其特征在于，包括COVID-19核衣殼蛋白抗原膠體金和COVID-19纖突蛋白抗原膠體金；所述COVID-19核衣殼蛋白抗原膠體金和COVID-19纖突蛋白抗原膠體金的質量配比為1:1；

所述COVID-19核衣殼蛋白抗原膠體金中包含的COVID-19核衣殼蛋白，所述COVID-19核衣殼蛋白是基于COVID-19核衣殼蛋白的全基因，經表達純化獲得的融合蛋白；所述COVID-19纖突蛋白抗原膠體金中包含的COVID-19纖突蛋白，所述COVID-19纖突蛋白是基于S1蛋白Gln14-Arg685區域的基因，經表達純化獲得的融合蛋白；

所述COVID-19纖突蛋白通過以下表達和純化方法制備獲得，包括以下步驟：

步驟1，全合成編碼S1蛋白Gln14-Arg685區域的基因，將S1基因克隆至真核表達載體，構成S1-mFc融合基因；

步驟2，將S1-mFc表達質粒電轉到感受態大腸桿菌，挑取陽性單克隆，擴增后提取質粒；

步驟3，使用轉染試劑將S1-mFc表達質粒轉染到293F細胞中，在無血清培養基中繼續培養；

步驟4，收集細胞培養基，離心獲得上清，分離純化S1-mFc融合蛋白；

所述步驟1中，所述真核表達載體為pMFcIg，S1基因克隆到真核表達載體的IL2分泌信號肽和小鼠Fc標簽基因之間，構成S1-mFc融合基因。

2.根據權利要求1所述的一種基于混合抗原快速檢測新型冠狀病毒抗體試劑盒，其特征在于，所述COVID-19核衣殼蛋白通過以下表達和純化方法制備獲得，包括以下步驟：

步驟1，全合成編碼核衣殼蛋白的基因，將核衣殼蛋白的基因克隆至原核表達載體，構建N-His表達載體；

步驟2，將表達載體轉入感受態大腸桿菌中，誘導表達核衣殼蛋白；

步驟3，收集細胞，破碎細胞后離心獲得上清，分離純化N-His融合蛋白。

3.根據權利要求2所述的一種基于混合抗原快速檢測新型冠狀病毒抗體試劑盒，其特征在于，所述步驟1中，所述原核表達載體包括pET28a，核衣殼蛋白帶有His標簽，構建N-His表達載體。

4.根據權利要求2所述的一種基于混合抗原快速檢測新型冠狀病毒抗體試劑盒，其特征在于，所述步驟1中，克隆所采用的正向引物的核苷酸序列為：CAGTGTGTTAATCTTACAA CC；反向引物的核苷酸序列為：ACGTGCCCGCCGAGGAGAATT。

5.根據權利要求1或2所述的一種基于混合抗原快速檢測新型冠狀病毒抗體試劑盒，其特征在于，所述COVID-19核衣殼蛋白抗原膠體金的原料包括COVID-19核衣殼蛋白、氯金酸溶液和檸檬酸三鈉；所述COVID-19纖突蛋白抗原膠體金的原料包括COVID-19纖突蛋白、氯金酸溶液和檸檬酸三鈉。

6.根據權利要求5所述的一種基于混合抗原快速檢測新型冠狀病毒抗體試劑盒，其特征在于，所述COVID-19核衣殼蛋白抗原膠體金或COVID-19纖突蛋白抗原膠體金通過以下方法制備獲得，包括以下步驟：

步驟1，以氯金酸溶液、檸檬酸三鈉水溶液為原料配制膠體金溶液；

步驟2，將COVID-19核衣殼蛋白溶液或COVID-19纖突蛋白溶液分離純化；

步驟3，將分離純化后的COVID-19核衣殼蛋白或COVID-19纖突蛋白加入等體積的膠體金溶液中，經分離、沉淀、再溶解獲得COVID-19核衣殼蛋白抗原膠體金或COVID-19纖突蛋白抗原膠體金。

7.根據權利要求6所述的一種基于混合抗原快速檢測新型冠狀病毒抗體試劑盒，其特征在于，所述步驟2中，COVID-19核衣殼蛋白溶液或COVID-19纖突蛋白溶液通過透析分離純化：將COVID-19核衣殼蛋白溶液或COVID-19纖突蛋白溶液濃度稀釋至1mg/mL后轉入透析袋中，2℃-8℃下用濃度為20mmol/L、pH值為7.0的Tris緩沖液透析過夜。