[發(fā)明專利]一種辣椒素類物質(zhì)的電化學(xué)免疫傳感器檢測方法及應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010154907.9
• 申請日: 2020-03-09
• 公開（公告）號(hào): CN111208181A
• 公開（公告）日: 2020-05-29
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 楊青青;趙慶雪;孫霞;郭業(yè)民;張妍妍
• 申請（專利權(quán)）人: 山東理工大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N27/30
• 分類號(hào): G01N27/30;G01N27/327;G01N27/416;G01N33/53;G01N33/543
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一種辣椒素類物質(zhì)的電化學(xué)免疫傳感器檢測方法及應(yīng)用，涉及一種新的檢測血清的生物傳感器制備方法。本發(fā)明分別利用電沉積和滴涂技術(shù)的方式將普魯士藍(lán)?納米金、硫堇和辣椒素類物質(zhì)抗體依次修飾在玻碳電極表面。包括以下步驟：普魯士藍(lán)用含一定濃度醋酸的殼聚糖充分溶解，然后加入一定量金納米粒子充分混勻制備沉積液；經(jīng)過電流?時(shí)間電化學(xué)處理技術(shù)將混合溶液電沉積在電極表面；另外，在修飾好的電極表面滴加硫堇，可以加快電子傳遞速率的同時(shí)增強(qiáng)電極的穩(wěn)定性從而提高傳感器電信號(hào)。本發(fā)明免疫傳感器穩(wěn)定性好、選擇性優(yōu)、靈敏度高，可用于血清樣品中辣椒素類物質(zhì)的快速檢測。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種辣椒素類物質(zhì)的電化學(xué)免疫傳感器檢測方法及其在血清鑒別中的應(yīng)用，屬于醫(yī)學(xué)、免疫分析、電化學(xué)生物傳感器領(lǐng)域。

背景技術(shù)

辣椒素（反-8-甲基-N-香草基-6-壬烯酰胺）是辣椒果實(shí)中引起辣味口感的主要成分，它是衡量辣椒品質(zhì)和確定品種間差異的一個(gè)重要指標(biāo)；除此以外，近年來對于辣椒素其他功能的研究較為豐富，例如辣椒素具有長效鎮(zhèn)痛作用，人和動(dòng)物內(nèi)服或局部使用辣椒素都顯示其對傷害性熱和化學(xué)品刺激所引起的疼痛有明顯的失敏作用；辣椒素可以抑制胃酸的分泌，從而促進(jìn)堿性黏液的分泌，降低胃內(nèi)酸濃度，對于乙醇、阿斯匹林以及各種應(yīng)激所致的胃黏膜損傷有著明顯的保護(hù)作用；此外，還有報(bào)道指出，辣椒素曾作為興奮劑的主要成分，被用于賽馬等國際賽事中，引起惡劣影響；因此，在辣椒素的抗菌消炎、鎮(zhèn)痛止癢、促進(jìn)脂肪代謝、防治風(fēng)濕與腫瘤等藥用功效以及興奮劑檢測的研究中，均會(huì)涉及辣椒素在血液中濃度的測定，因此準(zhǔn)確、高靈敏的檢測血清中辣椒素含量至關(guān)重要

現(xiàn)有辣椒素的檢測方法有氣相色譜法、光譜法、高效液相色譜法、薄層色譜法、免疫分析法等；液相色譜法是檢測辣椒素比較普遍的一種方法，但是在做液相色譜時(shí)對于試驗(yàn)儀器的要求比較高，而且耗費(fèi)時(shí)間長，需要工作人員花費(fèi)大量時(shí)間調(diào)試儀器，當(dāng)儀器調(diào)試完畢后，最佳檢測期短，對于工作人員和儀器都是很大考驗(yàn)，而且在試驗(yàn)過程中，對比樣品要求苛刻，再加上血清樣品基質(zhì)復(fù)雜，對試驗(yàn)過程中制作參考依據(jù)提出來考驗(yàn)，需要耗費(fèi)大量人力物力，成本比較高昂；而我們需要一種能夠快速檢測，適應(yīng)性強(qiáng)，操作簡便，特異性強(qiáng)的方法，近幾年來興起的電化學(xué)免疫傳感器能夠很好的滿足我們的要求。

電化學(xué)分析，以其廣泛的高靈敏度高精度測量儀器和設(shè)備簡單，價(jià)格低廉等優(yōu)點(diǎn)，被廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)的環(huán)境能源出入境檢疫、食品安全等領(lǐng)域的公共安全監(jiān)控測試；電化學(xué)檢測的關(guān)鍵是產(chǎn)生高靈敏度、高強(qiáng)度的信號(hào)；因此，不同金屬離子對電信號(hào)的放大效應(yīng)引起了廣泛的關(guān)注，如Au³⁺、Ag²⁺等；但現(xiàn)有的電化學(xué)傳感器檢測辣椒素普遍存在電信號(hào)不穩(wěn)定的缺點(diǎn)，如果能夠利用抗原抗體特異性結(jié)合的原理制備一種能夠特異性檢測辣椒素的免疫傳感器，將為辣椒素的檢測開辟一條新的途徑，也為免疫傳感器的制備提供一種新方法。

普魯士藍(lán)是一種特殊的亞鐵氰化物(Fe₄^[I][Fe^II(CN)₆]₄)，由于其獨(dú)特的電化學(xué)和電催化性能及高活性，被廣泛用作傳感器的介質(zhì)；納米金顆粒具有獨(dú)特的導(dǎo)電性、生物相容性和光學(xué)性質(zhì)，可用于生物組分的高靈敏度檢測，是目前研究最廣泛的納米材料之一；硫堇穩(wěn)定性好，易于聚合，加速了電子的轉(zhuǎn)移，進(jìn)一步提高了傳感器的靈敏度。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的就是針對傳統(tǒng)方法試驗(yàn)成本高、操作時(shí)間長的問題，提供一種制備簡單、穩(wěn)定性高、選擇性好的電化學(xué)免疫傳感器，并用于辣椒素、合成辣椒素、二氫辣椒素三種辣椒素類物質(zhì)的檢測；基于硫堇/普魯士藍(lán)-納米金納米復(fù)合物制備的雙重放大信號(hào)免疫傳感器，使得該方法擁有靈敏度高、線性范圍寬、成本低等優(yōu)良分析性能，具有制備工藝簡單、靈敏度好、檢測時(shí)間短等優(yōu)點(diǎn)，在血清中的辣椒素類物質(zhì)檢測領(lǐng)域中具有很好的實(shí)用前景。

本發(fā)明的技術(shù)方案為：普魯士藍(lán)和金納米粒子通過電沉積技術(shù)修飾在玻碳電極表面，辣椒素類物質(zhì)抗體、硫堇通過滴涂偶聯(lián)在在已修飾了普魯士藍(lán)-納米金的電極表面，實(shí)現(xiàn)電化學(xué)免疫傳感器的構(gòu)建，包括如下步驟