[發明專利]一種辣椒素類物質的電化學免疫傳感器檢測方法及應用

在審

• 申請號: 202010154907.9
• 申請日: 2020-03-09
• 公開（公告）號: CN111208181A
• 公開（公告）日: 2020-05-29
• 發明（設計）人: 楊青青;趙慶雪;孫霞;郭業民;張妍妍
• 申請（專利權）人: 山東理工大學
• 主分類號: G01N27/30
• 分類號: G01N27/30;G01N27/327;G01N27/416;G01N33/53;G01N33/543
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1. 一種辣椒素類物質的電化學免疫傳感器，其特征在于，通過將普魯士藍-納米金和硫堇先后分別以電沉積和滴涂的方式修飾在玻碳電極表面來增強電極的導電性和固定辣椒素類物質抗體，后用BSA封閉非特異性位點，實現傳感器的構建，包括如下步驟

（1）玻碳電極預處理：首先將裸玻碳電極在0.3 μm氧化鋁泥漿中進行拋光至鏡面，然后將其先后在超純水和無水乙醇中分別超聲1分鐘并用氮氣吹干，最后將玻碳電極在濃度為5mM鐵氰化鉀溶液中，用循環伏安法測定其電位差小于80 mV，4℃保存，備用

（2）制備修飾電極：首先將普魯士藍-納米金復合材料通過電沉積的方式固定在電極表面，后將制備好的硫堇溶液滴涂在電極表面，室溫干燥，制得修飾電極

（3）固定抗體：將步驟（2）制得的電極浸入適合濃度的辣椒素類物質抗體溶液中，4℃孵育過夜，使辣椒素類物質抗體固定在硫堇/普魯士藍-納米金復合材料層

（3）滴涂BSA封閉液以封閉電極表面非特異性結合位點，沖洗并吹干，制得所述辣椒素類物質的電化學免疫傳感器。

2.根據權利要求1所述的一種辣椒素類物質的電化學免疫傳感器的制備方法，其特征在于，包括一下步驟

（1）普魯士藍-納米金復合材料的制備

首先將50mL 0.01 wt% 四氯金酸溶液在磁性攪拌機攪拌下加熱至沸點，然后迅速加入2.5 mL 1wt %的檸檬酸鈉溶液，當混合物變成深紅色時，繼續大力攪拌，煮沸15分鐘，然后繼續攪拌，冷卻至室溫，4℃避光存放；稱取 0.1 g殼聚糖，溶于200 mL 1.0%乙酸溶液中，室溫下攪拌3小時，使殼聚糖完全溶解后，將0.0625g FeCl₃、0.0822g K₃[Fe(CN)₆]、0.7455gKCl和1 mL濃鹽酸分別加入上述殼聚糖溶液100 mL中，超聲分散至得到深綠色分散體；最后向混合溶液中加入1 mL制備好的納米金，并用超聲波在室溫下分散0.5小時，直至完全溶解，即可得到普魯士藍-納米金復合材料

硫堇溶液的制備

首先稱取100 mg硫堇粉末，將其放入燒杯中，然后加入超純水攪拌溶解定容至25 mL，得到4 mg/mL的硫堇溶液

辣椒素類物質電化學免疫傳感器的制備

首先，將預處理好的玻碳電極浸入普魯士藍-納米金復合材料溶液中，通過電沉積的方式使其固定在電極表面，然后，在普魯士藍-納米金復合材料層滴加5 μL硫堇溶液，室溫組裝；將組裝好的電極浸入1 mL 97.7 ng/mL辣椒素類物質抗體溶液中，4℃孵育過夜；用pH=7.5的磷酸鹽緩沖液沖洗干凈后，繼續滴加5 μL質量分數為0.5%的BSA，室溫封閉40分鐘；將所得電極用pH=7.5的磷酸鹽緩沖液沖洗干凈，晾干，即可得到所制備的電化學免疫傳感器。