[發明專利]纖維蛋白原降解產物質控品及其制備方法

在審

• 申請號: 202010154360.2
• 申請日: 2020-03-07
• 公開（公告）號: CN111337694A
• 公開（公告）日: 2020-06-26
• 發明（設計）人: 王明偉;趙年福;賈引軍;張輝;金君玉;吳一凡
• 申請（專利權）人: 蘇州德沃生物技術有限公司
• 主分類號: G01N33/86
• 分類號: G01N33/86;G01N33/68;C12P21/06;C07K14/75;C07K1/14
• 代理公司: 蘇州新知行知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 32414
• 代理人: 鄭麗玲

1.一種纖維蛋白原降解產物質控品的制備方法，其特征在于：其包括以下步驟：

1)稱取0.05-0.30g的血纖維蛋白，放入容器內，進行攪拌，緩慢加入2—10mL的緩沖液，緩沖液的濃度為10—60mmol/L；

2)將步驟1的容器置于磁力攪拌器上，在室溫下，以300-600RPM的轉速攪拌5-15min，并避免血纖維蛋白附于容器壁上；

3)向步驟2的容器中加入40-150μl的溶血酶，溶血酶的濃度為0.01μg/μl—0.62μg/μl，在室溫下以300-600RPM的轉速攪拌5-15min，對血纖維蛋白進行酶切；

4)將磁力攪拌器轉移至生化培養箱中，培養溫度設定為25-40℃，磁力攪拌器繼續攪拌8-16h；

5)將步驟4的磁力攪拌器移出生化培養箱，置于室溫下，輕輕拍打容器，使容器壁上的附著物落入容器內，在室溫下攪拌8-20min后，加入50-200μl的抑酶肽溶液，抑酶肽溶液的濃度20—500mg/ml；

6)在室溫下攪拌10-40min后，將反應液轉移至離心管中，將離心速度設置為6000G-12000G，離心10-30min；

7)將離心上清液轉移至容器中，制得纖維蛋白原降解產物質控品。

2.根據權利要求1所述的纖維蛋白原降解產物質控品的制備方法，其特征在于：向步驟7制得的纖維蛋白原降解產物質控品中加入凍干保護液和防腐劑，依次通過第一預凍段、第二預凍段和預凍恒溫段、第一干燥段、第二干燥段和第三干燥段的凍干處理，制成凍干的糖纖維蛋白原降解產物質控品，第一預凍段的溫度為-5℃～-15℃，持續2-3小時，第二預凍段的溫度為-15℃～-45℃，持續2-3小時，第三預凍段的溫度為-42℃～-45℃，持續1-2小時，第一干燥段的溫度為-45℃～-15℃，持續12-15小時，第二干燥段的溫度為-15℃～-5℃，持續10-12小時，第三干燥段的溫度為5℃～20℃，持續8-10小時。

3.根據權利要求2所述的纖維蛋白原降解產物質控品的制備方法，其特征在于：所述的凍干保護液中包含有甘露醇和牛血清白蛋白，甘露醇的質量濃度為0.5～3％，牛血清白蛋白的質量濃度為0.3～2％。

4.根據權利要求2所述的纖維蛋白原降解產物質控品的制備方法，其特征在于：所述的纖維蛋白原降解產物質控品與凍干保護液的體積比為1:(50～1500)。

5.根據權利要求1所述的纖維蛋白原降解產物質控品的制備方法，其特征在于：所述的凍干保護液中的凍干保護劑為海藻糖、蔗糖、聚乙烯吡咯烷酮或甘油中的任意一種或幾種的組合，凍干保護劑在凍干保護液中的質量濃度為3～8％。

6.根據權利要求1所述的纖維蛋白原降解產物質控品的制備方法，其特征在于：步驟1中所述的緩沖鹽為TBS緩沖液、磷酸鹽緩沖液、4-羥乙基哌嗪乙磺酸或2-(N-嗎啡啉)乙磺酸鈉中的任意一種或幾種的組合。

7.根據權利要求2所述的纖維蛋白原降解產物質控品的制備方法，其特征在于：所述的凍干保護液的pH值為6.8～7.4。

8.根據權利要求2所述的纖維蛋白原降解產物質控品的制備方法，其特征在于：所述的防腐劑為疊氮鈉、苯甲酸鈉、山梨酸鉀或Procline 300、Procline 950中的任意一種或幾種的組合。

9.一種權利要求1-8中任意一項的制備方法制成的纖維蛋白原降解產物質控品，其特征在于：纖維蛋白原降解產物質控品是利用前述的制備方法制備而成的。