[發明專利]同時檢測8種動物成分的引物、試劑盒及檢測方法和應用

有效

• 申請號: 202010151869.1
• 申請日: 2020-05-21
• 公開（公告）號: CN111334585B
• 公開（公告）日: 2022-06-28
• 發明（設計）人: 朱麗萍;顏世敢;童奎杰
• 申請（專利權）人: 齊魯工業大學
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12Q1/686;C12N15/11
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本發明公開了一步法同時檢測食品或飼料中8種動物源性成分的引物組合物、試劑盒及其檢測方法和應用。利用本發明的引物、試劑盒以及檢測方法經過一步多重PCR反應可以同時快速鑒定出食品或飼料中是否含有豬、牛、羊、雞、鴨、兔、狐貍、貂中的1～8種動物源成分。本發明方法具有快速、高效、特異、靈敏、經濟等優點，一步反應就能實現8種動物源成分的同時鑒定。

技術領域

本發明屬于基因檢測領域，具體涉及一步法同時檢測食品或飼料中的豬、牛、羊、雞、鴨、兔、狐貍、貂等8種動物源性成分的引物組合物、試劑盒及其檢測方法和應用。

背景技術

食品安全是當今社會高度關注的熱點話題。隨著人民生活水平的提高，肉及肉制品在飲食結構中所占的比重越來越大。不法商家常常采用以次充好、摻雜使假等手段來降低肉及肉制品的成本，攫取不當利潤，導致當前市場中肉及肉制品中假冒偽劣現象突出。市場中常見的肉類摻雜使假手段是用規模化飼養的價廉的動物肉(如雞肉、鴨肉)來假冒質優價高的牛羊肉，甚至用不可食用的肉類(如狐貍肉、貂肉等)來假冒牛、羊肉和豬肉、兔肉等。

肉類的摻雜使假現象嚴重擾亂了市場正常秩序，侵害了消費者的正當權益，甚至危害人民生命財產安全，引發嚴重的食品安全問題及其他問題。人們食用了假冒偽劣肉制品后，可能因產品中含有某些致病微生物或對人體有毒有害的成分，導致生病、中毒等狀況發生，或使有些對個別種類的肉類過敏的人群在不知情的情況下食用了過敏原，引發過敏性疾病。這就要求建立準確高效的肉類鑒定方法，在此基礎上，食品監管部門才能加大監管以確保食品安全，保障消費者免受肉類造假帶來的對權益和健康的侵害。

同樣，飼料中也存在肉類蛋白原料摻雜使假情況。國內外均報道過用低值肉肉類蛋白原料假冒高值肉類蛋白原料的現象，或使用動物內臟、羽毛粉、骨粉等代替魚粉等情況，擾亂了飼料行業的正常秩序，增加了養殖患病風險等。這也要求建立準確高效的肉類鑒定方法，在此基礎上，農業監管部門才能加大監管力度以確保飼料安全，從而保障養殖安全和畜產品安全。

快速、準確、便捷、高效、經濟的肉類鑒別方法是食品檢測和飼料檢測領域面臨的難題。傳統的基于形態學特征(風味、顏色、形狀、口味、外觀)建立的肉類鑒定方法，如感官分析法、組織學鑒別法等，無法區分不同的動物源成分?；诘鞍踪|分析建立的肉類鑒別方法，如電泳法、ELISA法等，存在分辨率低，易出現假陽性、假陰性結果，而且在食品和飼料加工、熟制過程中，蛋白質經歷高溫、高壓而發生變性，影響檢測結果的準確性，導致基于蛋白質分析的檢測方法在熟肉制品的成分檢測上尤其困難。

雖然在食品、飼料加工過程中，一些用于區分肉類的生物標記會遭到破壞。但DNA在所有組織和細胞中具有極高的穩定性和廣布性，因此基于DNA的肉類鑒定方法具有良好的適用性。基于DNA的肉類鑒別方法主要有聚合酶鏈式反應(PCR)、多重PCR、熒光定量PCR、LAMP等。

(1)PCR：能夠指數級擴增特定的DNA片段，特異性和靈敏度高，可用于鑒定造假肉類原材料和肉制品。經典的PCR是用一對特異性引物來擴增一個目標片段。傳統PCR方法鑒定肉類，一次只能用一對引物來鑒定一個物種。對兩種以上的肉類及其制品則要分別進行多次PCR檢測才能鑒別，耗時長、成本高。

(2)多重PCR：是在同一PCR反應體系里加如2對以上的引物，同時擴增多個核酸片段，用于鑒別含有2種以上的肉類制品。多重PCR的檢測效率高于傳統PCR。多重PCR檢測需要克服的兩大難題是多重PCR引物的設計以及多重PCR反應條件的優化，前者以保證引物的特異性，后者確保檢測的穩定性。

(3)實時熒光定量PCR：可以對肉制品進行定性或定量分析，靈敏度高。與PCR相比，熒光PCR省略了電泳或測序鑒定步驟。但是熒光PCR需要購置昂貴的熒光定量PCR儀以及昂貴的熒光PCR試劑盒，檢測操作過程中還容易出現污染和假陽性結果。況且在多數情況下肉類檢測只要求定性檢測，定量檢測沒有現實意義。相比之下，多重PCR更適用于日常生產活動中的肉類檢測，熒光PCR檢測方法難以在實際中普及推廣。

本發明與現有發明的區別：