[發明專利]同時檢測8種動物成分的引物、試劑盒及檢測方法和應用有效
| 申請號： | 202010151869.1 | 申請日： | 2020-05-21 |
| 公開（公告）號： | CN111334585B | 公開（公告）日： | 2022-06-28 |
| 發明（設計）人： | 朱麗萍;顏世敢;童奎杰 | 申請（專利權）人： | 齊魯工業大學 |
| 主分類號： | C12Q1/6888 | 分類號： | C12Q1/6888;C12Q1/686;C12N15/11 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 250353 山東*** | 國省代碼： | 山東;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 同時 檢測 動物 成分 引物 試劑盒 方法 應用 | ||
1.同時檢測羊、牛、豬、雞、鴨、兔、狐貍和貂8種動物成分的PCR檢測方法，其特征在于，所述檢測方法中使用如下引物：
(1)羊源特異引物：
Goat-F：CCACCAACTACCCACTTT，如SEQ ID NO:1所示；
Goat-R：TTGCGTCTGTTCGTCCAT，如SEQ ID NO:2所示；
(2)牛源特異引物：
Bovine-F：GCATCATTCTACCCACTTT，如SEQ ID NO:3所示；
Bovine-R：CGACTATTGTTGGTAGAAAAG，如SEQ ID NO:4所示；
(3)豬源特異引物：
Pig-F：TTGCCCTTCCATCATTAC，如SEQ ID NO:5所示；
Pig-R：CTGGGATAGCATCTGTTT，如SEQ ID NO:6所示；
(4)雞源特異引物：
Chicken-F：GGATGATGACAAGGACGAG，如SEQ ID NO:7所示；
Chicken-R：TAGTAAGGTTATGCGGAGG，如SEQ ID NO:8所示；
(5)鴨源特異引物：
Duck-F：TAGTCATAGCAAGCCTCCA，如SEQ ID NO:9所示；
Duck-R：CGTGGTATTAGTTATGTGGG，如SEQ ID NO:10所示；
(6)狐貍源特異引物：
Fox-F：CCTAACTATCCAAACTCTCACC，如SEQ ID NO:11所示；
Fox-R：GGCCATGGTGATTATGAA，如SEQ ID NO:12所示；
(7)貂源特異引物：
Mink-F：CCTATCACCCTTTCACTTCTG，如SEQ ID NO:13所示；
Mink-R：AGTTAGTGCTGTTGCGTATG，如SEQ ID NO:14所示；
(8)兔源特異引物：
Rabbit-F：GGATGCTCAGGAGGTAGA，如SEQ ID NO:15所示；
Rabbit-R：CAGGTCTGATGTTGGGAT，如SEQ ID NO:16所示；
所述PCR檢測方法中的反應體系為：10×PCR buffer 2.5μL，25mmol/L MgCl2 1.6μL,Taq DNA聚合酶3U，2.5mmol/L dNTPs 2.8μL，狐、羊、鴨的引物對的終濃度各為0.16μmol/L，兔、牛的引物對的終濃度各為0.2μmol/L，貂的引物對的終濃度為0.08μmol/L，豬的引物對的終濃度為0.48μmol/L，雞的引物對的終濃度為0.56μmol/L，最后用去離子水定容至25uL。
2.根據權利要求1所述的PCR檢測方法，所述PCR檢測方法的反應程序和結果判斷程序為：94℃預變性5min，94℃變性30s，55.6℃退火55s，72℃延伸90s，共40個循環，最后72℃延伸10min；取5μL PCR產物，與上樣緩沖液混勻，在1.5％濃度的瓊脂糖凝膠上進行電泳，電泳結束，取出凝膠，置凝膠成像儀中，于紫外燈下觀察條帶大小，判定結果。
3.引物組在制備檢測羊、牛、豬、雞、鴨、兔、狐貍和貂8種動物成分的試劑盒中的應用，所述引物組包括以下引物：
(1)羊源特異引物：
Goat-F：CCACCAACTACCCACTTT，如SEQ ID NO:1所示；
Goat-R：TTGCGTCTGTTCGTCCAT，如SEQ ID NO:2所示；
(2)牛源特異引物：
Bovine-F：GCATCATTCTACCCACTTT，如SEQ ID NO:3所示；
Bovine-R：CGACTATTGTTGGTAGAAAAG，如SEQ ID NO:4所示；
(3)豬源特異引物：
Pig-F：TTGCCCTTCCATCATTAC，如SEQ ID NO:5所示；
Pig-R：CTGGGATAGCATCTGTTT，如SEQ ID NO:6所示；
(4)雞源特異引物：
Chicken-F：GGATGATGACAAGGACGAG，如SEQ ID NO:7所示；
Chicken-R：TAGTAAGGTTATGCGGAGG，如SEQ ID NO:8所示；
(5)鴨源特異引物：
Duck-F：TAGTCATAGCAAGCCTCCA，如SEQ ID NO:9所示；
Duck-R：CGTGGTATTAGTTATGTGGG，如SEQ ID NO:10所示；
(6)狐貍源特異引物：
Fox-F：CCTAACTATCCAAACTCTCACC，如SEQ ID NO:11所示；
Fox-R：GGCCATGGTGATTATGAA，如SEQ ID NO:12所示；
(7)貂源特異引物：
Mink-F：CCTATCACCCTTTCACTTCTG，如SEQ ID NO:13所示；
Mink-R：AGTTAGTGCTGTTGCGTATG，如SEQ ID NO:14所示；
(8)兔源特異引物：
Rabbit-F：GGATGCTCAGGAGGTAGA，如SEQ ID NO:15所示；
Rabbit-R：CAGGTCTGATGTTGGGAT，如SEQ ID NO:16所示。
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