[發(fā)明專利]檢測(cè)中藥產(chǎn)品中多環(huán)芳烴標(biāo)志物的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010150978.1
• 申請(qǐng)日: 2020-03-06
• 公開（公告）號(hào): CN111289672B
• 公開（公告）日: 2022-08-26
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 吳平谷
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 浙江省疾病預(yù)防控制中心
• 主分類號(hào): G01N30/88
• 分類號(hào): G01N30/88;G01N30/06;G01N30/14
• 代理公司: 北京高沃律師事務(wù)所 11569
• 代理人: 趙曉琳

1.一種檢測(cè)中藥產(chǎn)品中多環(huán)芳烴標(biāo)志物的樣品前處理方法，所述多環(huán)芳烴標(biāo)志物為苯并[a]蒽、?、苯并[a]熒蒽和苯并[a]芘，所述前處理方法包括以下步驟：

1）提取：

將待測(cè)中藥產(chǎn)品樣品、內(nèi)標(biāo)溶液和乙醇混合后進(jìn)行第一超聲處理，得到第一混合溶液；

將所述第一混合溶液與水混合后依次進(jìn)行第一渦旋提取和第二超聲處理，得到第二混合溶液；

將所述第二混合溶液和正己烷混合后進(jìn)行第二渦旋提取，然后經(jīng)離心，取上層，得到第一正己烷提取液；

2）凈化：

將所述第一正己烷提取液進(jìn)行Florisil柱凈化，得到第一凈化液；所述Florisil柱凈化包括如下步驟：將所述第一正己烷提取液過(guò)Florisil柱并收集提取液流出液，然后用第一洗脫液進(jìn)行洗脫，收集洗脫流出液，將所述提取液流出液與洗脫流出液合并，得到第一凈化液；所述第一洗脫液為二氯甲烷-正己烷混合溶液，所述二氯甲烷-正己烷混合溶液中二氯甲烷和正己烷的體積比為2~4:17；所述第一洗脫液的用量為0.5~1.5倍柱體積；

將所述第一凈化液進(jìn)行第一溶劑去除后，將所得第一凈化提取物溶解于正己烷中，得到第一凈化提取物的正己烷溶液；

將所述第一凈化提取物的正己烷溶液進(jìn)行EU多環(huán)芳烴固相萃取柱凈化，得到第二凈化液；所述EU多環(huán)芳烴固相萃取柱的填料為二乙烯基苯聚合物和N-丙基乙二胺；所述EU多環(huán)芳烴固相萃取柱凈化包括如下步驟：將所述第一凈化提取物的正己烷溶液過(guò)EU多環(huán)芳烴固相萃取柱，然后采用正己烷進(jìn)行淋洗除雜，再用第二洗脫液對(duì)淋洗除雜后的EU多環(huán)芳烴固相萃取柱進(jìn)行洗脫，收集洗脫流出液，得到第二凈化液；所述第二洗脫液為二氯甲烷-乙酸乙酯混合溶液，所述二氯甲烷-乙酸乙酯溶液中二氯甲烷和乙酸乙酯的體積比為1~1.5:1，所述第二洗脫液的用量為0.5~1.5倍柱體積，所述淋洗除雜用正己烷的用量為0.5~1.5倍柱體積；

將所述第二凈化液中進(jìn)行第二溶劑去除，得到第二凈化提取物。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述樣品前處理方法，其特征在于，所述步驟1）中，待測(cè)樣品和乙醇的質(zhì)量體積比為0.1~2.0g:10mL，水和待測(cè)樣品的體積質(zhì)量比為10mL:0.1~2.0g，正己烷和待測(cè)樣品的體積質(zhì)量比為10mL:0.1~2.0g。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述樣品前處理方法，其特征在于，所述內(nèi)標(biāo)溶液為D₁₂-苯并[a]蒽、D₁₂-?、D₁₂-苯并[b]熒蒽和D₁₂-苯并[a]芘的混合丙酮溶液。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述樣品前處理方法，其特征在于，所述第一渦旋提取的轉(zhuǎn)速為2500rpm，時(shí)間為40~80s。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述樣品前處理方法，其特征在于，所述第二渦旋提取的轉(zhuǎn)速為2500rpm，時(shí)間為4~6min。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述樣品前處理方法，其特征在于，所述第一正己烷提取液過(guò)Florisil柱時(shí)的流速為1~2mL/min，所述第一洗脫液的流速為0.5~2mL/min。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述樣品前處理方法，其特征在于，所述第一凈化提取物的正己烷溶液過(guò)EU多環(huán)芳烴固相萃取柱時(shí)的流速為1~2mL/min。

8.一種中藥產(chǎn)品中多環(huán)芳烴標(biāo)志物的測(cè)定方法，包括以下步驟：

（1）采用權(quán)利要求1~7任一項(xiàng)所述的樣品前處理方法對(duì)待測(cè)樣品進(jìn)行樣品前處理，得到第二凈化提取物；

（2）將所述第二凈化提取物溶解于丙酮-異辛烷溶液中，得到待測(cè)液；

（3）將所述待測(cè)液進(jìn)行氣相色譜-質(zhì)譜分析，得到質(zhì)量色譜圖；

（4）根據(jù)所述質(zhì)量色譜圖，采用標(biāo)準(zhǔn)曲線法，計(jì)算多環(huán)芳烴標(biāo)志物的含量。