[發明專利]一種利用二硫化鉑的葡萄糖比色檢測法

在審

• 申請號: 202010149846.7
• 申請日: 2020-03-06
• 公開（公告）號: CN111239125A
• 公開（公告）日: 2020-06-05
• 發明（設計）人: 岳婉晴;張文先;李秀平
• 申請（專利權）人: 中國藥科大學
• 主分類號: G01N21/78
• 分類號: G01N21/78;G01N21/31
• 代理公司: 南京天華專利代理有限責任公司 32218
• 代理人: 吳爽;徐冬濤

本發明公開了一種利用二硫化鉑的葡萄糖比色檢測方法，利用葡萄糖氧化酶氧化葡萄糖生產葡萄糖酸和過氧化氫，再用二硫化鉑為催化劑催化生成的過氧化氫與顯色劑的顯色反應來檢測葡萄糖的濃度，可解決現有技術中對葡萄糖檢測的操作要求高，檢測過程復雜，檢測成本高，檢測時間長，背景干擾大等問題，本發明的方法成本低、檢測快速、操作方便、能夠實現可視化快速檢測葡萄糖的濃度，有極大的應用價值，市場前景廣闊。

技術領域

本發明屬于葡萄糖檢測技術領域，具體涉及一種利用二硫化鉑的葡萄糖比色檢測方法。

背景技術

葡萄糖是一種重要的生物醫學和生化分析物質，在生理代謝中起著關鍵作用。血液或體液中的血糖水平與機體功能密切相關，因為血糖水平異常與某些疾病如糖尿病或低血糖有直接關系。因此，高性能的葡萄糖傳感器在生物醫學診斷中顯示出良好的應用前景。到目前為止，已經開發了許多葡萄糖傳感器，包括體內和體外生物測定。大多數葡萄糖生物傳感器利用光譜信號讀出，如熒光光譜、偏振譜和拉曼光譜，然而這些都需要實驗室規模的操作、精密儀器和專業實驗人員。

發明內容

本發明的目的在于提供一種利用二硫化鉑的葡萄糖比色檢測方法，以解決現有技術中對葡萄糖檢測的操作要求高，檢測過程復雜，檢測成本高，檢測時間長，背景干擾大等問題，本發明的方法成本低、檢測快速、操作方便、能夠實現可視化快速檢測葡萄糖的濃度，有極大的應用價值，市場前景廣闊。

本發明解決其技術問題采用的技術方案是：

一種利用二硫化鉑的葡萄糖比色檢測法，首先利用葡萄糖氧化酶氧化葡萄糖生產葡萄糖酸和過氧化氫，再用二硫化鉑為催化劑催化生成的過氧化氫與顯色劑的顯色反應來檢測葡萄糖的濃度。

上述利用二硫化鉑的葡萄糖比色檢測法，主要包括如下步驟：

步驟1，首先對樣品進行預處理，加磷酸二氫鈉緩沖液稀釋后，再加入葡萄糖氧化酶溶液混合、反應；

步驟2，加入的二硫化鉑溶液，顯色劑以及的磷酸二氫鈉緩沖液進行顯色反應；

步驟3，通過目視比色法或者紫外-可見分光光度計法檢測。

優選的，所述步驟3中，目視比色法是指，將顯色反應后的溶液顏色直接與比色標準系列進行比較，或在顯色反應后加入硫酸溶液終止反應，再采用目視比色法半定量測定葡萄糖的濃度。

其中，所述比色標準系列的制備方法如下：是將葡萄糖標準品加磷酸二氫鈉緩沖液稀釋，配制成已知的不同濃度的葡萄糖標準溶液與葡萄糖氧化酶混合反應后，加入二硫化鉑溶液(10μg/mL)、顯色劑和磷酸二氫鈉緩沖液進行顯色反應即得比色標準系列，或在顯色反應后加入硫酸溶液終止反應得到比色標準系列。

優選的，所述步驟3中，紫外-可見分光光度計法是指顯色反應結束后，直接測定溶液的吸光度，或在顯色反應后加入硫酸溶液終止反應，再采用紫外-可見分光光度計測定溶液的吸光度，并根據標準曲線方程計算葡萄糖的含量。

其中，所述標準曲線方程的建立是將葡萄糖標準品加磷酸二氫鈉緩沖液稀釋，配制成已知的不同濃度的葡萄糖標準溶液與葡萄糖氧化酶混合反應后，加入二硫化鉑溶液、顯色劑和緩沖液，顯色反應后直接采用紫外-可見分光光度計測定在652nm波長處的吸光度，或在顯色反應后先加入硫酸溶液終止反應，再采用紫外-可見分光光度計在450nm波長處測定吸光度，并以吸光度作為縱坐標，葡萄糖的濃度作為橫坐標，繪制標準曲線并得出標準曲線方程。

優選的，所述步驟1和步驟3中，稀釋樣品和葡萄糖標準品所用磷酸二氫鈉緩沖液的pH值為3-9，濃度為0.1mM；更優選的，所述pH值為7.0。

優選的，所述步驟2中，顯色反應中所用磷酸二氫鈉緩沖液的pH值為2-7，濃度為25mM；更優選的，所述pH值為5.0。