[發明專利]小麥全蝕病菌禾頂囊殼LAMP檢測引物組及方法有效
| 申請號： | 202010149611.8 | 申請日： | 2020-03-06 |
| 公開（公告）號： | CN111088395B | 公開（公告）日： | 2023-02-03 |
| 發明（設計）人： | 崔林開;胡艷紅;和志華;李夢琪;鄧俊麗 | 申請（專利權）人： | 河南科技大學 |
| 主分類號： | C12Q1/6895 | 分類號： | C12Q1/6895;C12Q1/6844;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/645 |
| 代理公司： | 洛陽公信知識產權事務所(普通合伙) 41120 | 代理人： | 時亞娟 |
| 地址： | 471000 河*** | 國省代碼： | 河南;41 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 小麥 病菌 禾頂囊殼 lamp 檢測 引物 方法 | ||
1.小麥全蝕病菌禾頂囊殼LAMP檢測引物組在小麥全蝕病菌禾頂囊殼檢測方面的應用，其特征在于：所述LAMP引物組包括四條特異性引物，具體如下：
QS-FIP：CAGGGTTTGTAACCTCCGGCACATACCTTTACTGTTGCTTC；
QS-BIP：AACTTTCAACAACGGATCTCTTGGTTACTTATCGCATTTCGCTG；
QS-F3：AAACTCCAACCCCTGTGA；
QS-B3：ACTGAATTCTGCAATTCACA；
所述四條特異引物的靶標基因為小麥全蝕病菌禾頂囊殼的ITS。
2.根據權利要求1所述的應用，其特征在于：所述檢測的方法，包括以下步驟：
步驟一、提取基因組DNA：選取小麥植株的發病部位，提取基因組DNA，測定提取的基因組DNA的濃度和純度，作為模板DNA，備用；
步驟二、確定反應體系：每25μL反應體系中，由以下成分組成：2.5 μL 10×ThermoPolBuffer，1.5 μL 100 mM MgSO4、3.5 μL 10 mM dNTPs、10 μM QS-FIP和QS-BIP各4 μL、10 μM QS-F3和QS-B3各0.5 μL、1μL 8000U/mL Bst DNA Polymerase和1μL模板DNA，滅菌超純水補足25 μL；
步驟三、執行反應程序：將步驟二中所述反應體系中的試劑混均勻后，置恒溫64℃水浴鍋中反應60 min，然后向反應體系中加入 1μL核酸染料SYBR Green I，混勻后觀察反應體系顏色的變化，在波長440～485 nm照射下，陽性為熒光黃綠色，陰性為橙色。
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