[發(fā)明專利]一種免核酸提取的病毒保存液

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• 申請?zhí)枺?/td>: 202010148767.4
• 申請日: 2020-03-05
• 公開（公告）號: CN111321123A
• 公開（公告）日: 2020-06-23
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 徐堤
• 申請（專利權(quán)）人: 北京天恩澤基因科技有限公司
• 主分類號: C12N7/00
• 分類號: C12N7/00;C12Q1/6844
• 代理公司: 北京東方匯眾知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11296
• 代理人: 王慶彬

1.一種免核酸提取的病毒保存液，其特征在于，包括A組分和B組分，其中A組分包含：

酸性緩沖液、吐溫20和在酸性條件下有活性的蛋白酶；其中，酸性緩沖液的摩爾濃度為20mM-100mM，pH在1.0-5.0，吐溫20的體積百分比為0.1％～2％，酸性蛋白酶的濃度為0.1-100mg/mL；

B組分包含：中性或偏堿性緩沖液，其濃度為0.5-1M，pH為7.0-9.0。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的病毒保存液，其特征在于，在A組分中，所述酸性緩沖液為乙酸-乙酸鈉緩沖液。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的病毒保存液，其特征在于，在A組分中，所述酸性蛋白酶為胃蛋白酶、胰蛋白酶或黑曲霉酸性蛋白酶。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的病毒保存液，其特征在于，在B組分中，所述中性或偏堿緩沖液為Tris-HCl或Tris-乙酸。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的病毒保存液，其特征在于所述病毒為RNA病毒或DNA病毒。

6.一種病毒核酸擴(kuò)增方法，其特征在于，包括以下步驟：

1)將病毒樣品保存于權(quán)利要求1-5中任一項(xiàng)所述的A組分中；

2)將1)的保存有病毒樣品的A組分與權(quán)利要求1-5中任一項(xiàng)所述的B組分混合均勻，于室溫下放置1-20分鐘，和

3)將2)的混合溶液加載到核酸擴(kuò)增儀中進(jìn)行核酸擴(kuò)增。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的病毒核酸擴(kuò)增方法，其特征在于，在步驟2)中A組分與B組分的混合比例為1:1。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的病毒核酸擴(kuò)增方法，其特征在于，在步驟3)中，在室溫下放置2-5分鐘。

9.根據(jù)權(quán)利要求6所述的病毒核酸擴(kuò)增方法，其特征在于，核酸擴(kuò)增方式包括RT-核酸擴(kuò)增和等溫?cái)U(kuò)增。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的病毒核酸擴(kuò)增方法，其特征在于，所述等溫?cái)U(kuò)增檢測選自環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增(Loop-mediated isothermalamplification,LAMP)、依賴核酸序列的擴(kuò)增(Nucleic acid sequence-based amplification,NASBA)、滾環(huán)擴(kuò)增技術(shù)(Rolling circleamplification,RCA)、單引物等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)(Single primer isothermalamplification,SPIA)、依賴解旋酶DNA等溫?cái)U(kuò)增(Helicase-dependent isothermal DNAamplification,HDA)、重組酶聚合酶擴(kuò)增(Recombinase Polymerase Amplification,RPA)或鏈替代擴(kuò)增(Strand displacement amplification,SDA)。