[發明專利]一種免核酸提取的病毒保存液

在審

• 申請號: 202010148767.4
• 申請日: 2020-03-05
• 公開（公告）號: CN111321123A
• 公開（公告）日: 2020-06-23
• 發明（設計）人: 徐堤
• 申請（專利權）人: 北京天恩澤基因科技有限公司
• 主分類號: C12N7/00
• 分類號: C12N7/00;C12Q1/6844
• 代理公司: 北京東方匯眾知識產權代理事務所(普通合伙) 11296
• 代理人: 王慶彬

本發明公開了一種免核酸提取的病毒保存液，包含A組分和B組分，其中A組分包含：酸性緩沖液、吐溫20和酸性蛋白酶；其中，酸性緩沖液的摩爾濃度為20mM?100mM，pH在1.0?5.0，吐溫20的體積百分比為0.1％?2％，酸性蛋白酶的濃度為0.1?100mg/mL；B組分包含：中性或偏堿性緩沖液，其濃度為0.5?1M，pH為7.0?9.0。本發明的保存液可用保存RNA病毒和DNA病毒，在保存的過程中病毒感染力被嚴重減弱，甚至完全喪失感染力，并且保存液可以直接用來進行病毒核酸擴增，無效進行核酸提取。

技術領域

本發明涉及分子生物學技術領域，具體涉及一種既能保存病毒樣品又能直接用于核酸擴增的保存液。

背景技術

病毒(Virus)是一種具有比較原始的生命形態和生命特征的非細胞生物，通常由基因組和外殼蛋白構成。通常病毒具有如下特點：形體微笑，缺乏細胞結構；只含有一種核酸，DNA或者RNA；依靠自身核酸進行復制；缺乏完整的酶和能量系統；嚴格的細胞內寄生。從遺傳物質分類，病毒可以分為DNA病毒、RNA病毒、蛋白質病毒(如:朊病毒)。從病毒結構上來看，病毒可以分為真病毒(Euvirus，簡稱病毒)和亞病毒(Subvirus，包括類病毒、擬病毒、朊病毒)。從寄主類型上看，病毒可以分為噬菌體(細菌病毒)、植物病毒(如煙草花葉病毒)、動物病毒(如禽流感病毒、天花病毒、HIV等)。從病毒性質來分，病毒可以分為溫和病毒(例如HIV)、烈性病毒(例如狂犬病毒)。從病毒形態上來分，病毒可以分為球狀病毒、桿狀病毒、磚形病毒、冠狀病毒、絲狀病毒、輪狀病毒、有包膜的球狀病毒、具有球狀頭部的病毒、封于包含體內的昆蟲病毒等。目前，國際病毒分類委員會正式批準的病毒分類系統有3個目，62個科。

病毒在自然界分布廣泛，可感染細菌、真菌、植物、動物和人，常引起宿主發病。例如麻疹病毒可以引起宿主比如人呼吸道疾病，肝炎病毒可以引發宿主肝炎。2003年爆發的SARS和2020年初爆發的冠狀病毒肺炎，造成大量人員感染，給我國造成了沉重的經濟負擔。

為了研究病毒的分類地位、致病機理等，需要從宿主生物中分離保存病毒。科研人員經過不懈努力開發出了病毒保存液，用來保存病毒。第一代病毒保存液，病毒的致病性并未得到衰減，在研究、運輸過程中存在被感染的風險。為此，研究人員又開發了第二代保存液，在該保存液中，病毒的被滅活，致病性得以衰減，或完全滅活，因此安全運輸，但是這種保存液并不適合用來直接分析，比如直接用來進行核酸擴增分析，往往還需要進行復雜的核酸提取過程。在臨床檢測中，往往又需要直接用保存于保存液中的樣品直接進行核酸擴增分析。

由此可見，本領域急需即可以滅活病毒又可以直接用于核酸擴增無需核酸提取的病毒保存液。

發明內容

有鑒于此，本發明提供了一種既可以保存病毒，又可以直接用于核酸擴增無需核酸提取的病毒保存液，從而解決現有技術存在的保存液難以直接用于核酸擴增的技術問題。

本發明的目的及其技術問題的解決是通過以下技術方案實現的。

一方面，本發明提供了一種免核酸提取的病毒保存液，包含A組分和B組分，其中A組分包含：

酸性緩沖液、吐溫20和酸性蛋白酶；其中，酸性緩沖液的摩爾濃度為20mM-100mM，pH在1.0-5.0，吐溫20的體積百分比為0.1％～2％，酸性蛋白酶的濃度為0.1-100mg/mL；

B組分包含：中性或偏堿性緩沖液，其濃度為0.5-1M，pH為7.0-9.0。

在一個實施方案中，病毒為RNA病毒或DNA病毒。

在另一方面，本發明提供了一種病毒核酸擴增方法，包括以下步驟：

1)將病毒樣品保存于上述A組分中；

2)將1)的保存有病毒樣品的A組分與權利要求1-5中任一項所述的B組分混合均勻，于室溫下放置1-20分鐘，和