[發明專利]一種抗神經壞死病毒的單克隆抗體及其制備方法

在審

• 申請號: 202010148560.7
• 申請日: 2020-03-05
• 公開（公告）號: CN111378033A
• 公開（公告）日: 2020-07-07
• 發明（設計）人: 邢婧;張志琪;戰文斌;唐小千;繩秀珍;遲恒
• 申請（專利權）人: 中國海洋大學
• 主分類號: C07K16/10
• 分類號: C07K16/10;C12N5/20;G01N33/569
• 代理公司: 青島海昊知識產權事務所有限公司 37201
• 代理人: 王鐸

本發明公開了一種抗神經壞死病毒的單克隆抗體及其制備方法，所述單抗是由名稱：雜交瘤細胞株NNV?CP?3D11，保藏號：CCTCC NO：C202037，保藏單位：中國典型培養物保藏中心，湖北省武漢市武漢大學，保藏日期：2020年01月15日的雜交瘤細胞分泌的。間接酶聯免疫吸附實驗結果顯示，該單抗能與神經壞死病毒衣殼蛋白多肽和神經壞死病毒發生特異性結合。免疫印跡結果顯示，該單抗能特異性識別分子量約為40kDa的神經壞死病毒衣殼蛋白。間接免疫熒光結果表明，該單抗能特異性識別感染的細胞系中的神經壞死病毒。本發明制備的單克隆抗體為神經壞死病毒的快速檢測與診斷提供了重要工具，從而判斷魚體健康狀況，進而及時切斷傳播途徑，有效阻止病毒傳播，減少病毒感染帶來的經濟損失。

技術領域

本發明涉及一種單克隆抗體及其制備方法，具體涉及一種抗神經壞死病毒的單克隆抗體及其制備方法，其屬于魚類分子免疫學技術領域。

背景技術

神經壞死病毒（nervous necrosis virus，NNV)是一種世界范圍內流行、嚴重危害多種海水和淡水魚類的傳染性病原，其主要感染魚類的神經系統和視網膜，導致神經系統和視網膜的空泡化壞死，故因其引起的病癥被稱為病毒性神經壞死癥或病毒性腦病和視網膜病。NNV存在垂直和水平兩種傳播途徑，宿主眾多，分布廣泛。到目前為止，已知可被NNV感染的魚類超過120種，在除南極洲以外的其余大陸均有相關報道。NNV屬野田村病毒科（Nodaviridae）乙型野田村病毒屬（Betanodavirus），病毒粒子為無囊膜的二十面體，直徑約25nm，基因組由兩個單股正鏈RNA組成。其中，RNA1（3.1kb）編碼非結構蛋白A，即RNA依賴性RNA聚合酶（110kDa）；RNA2（1.4kb）編碼病毒衣殼蛋白（CP，42kDa），為病毒的唯一結構蛋白。

根據RNA2核苷酸序列的T4可變區，可將NNV劃分為4種基因型，分別為擬鲹神經壞死病毒型（SJNNV型）、鲀神經壞死病毒型（TPNNV型）、鰈神經壞死病毒型（BFNNV型）和石斑魚神經壞死病毒型（RGNNV型）。其中，RGNNV是存在最為普遍的基因型。進一步研究表明，NNV主要分為三種血清型，分別為血清型A（SJNNV），血清型B（TPNNV）和血清型C（BFNNV和RGNNV）。目前，4種基因型NNV的基因組測序已經全部完成，序列比對分析表明，不同基因型的NNV基因組序列具有不同程度的相似性。

自首次在廣東省大亞灣孵化的赤點石斑魚（Epinephelus akaara）中發現NNV以來，NNV在我國養殖或野生的斜帶石斑魚（Epinephelus coioides）、珍珠龍膽石斑魚（Epinephelus lanceolatus♂ × Epinephelus fuscoguttatus♀）、牙鲆（Paralichthys olivaceus）、半滑舌鰨（Cynoglossus semilaevis Gunther）、太平洋真鱈（Gadus macrocephalus）等魚類中相繼報道（均為RGNNV型），其引起的病害給我國水產養殖業造成了巨大的經濟損失。然而，關于NNV的入侵途徑，在宿主細胞內的感染機制和復制過程尚不明確。且NNV主要感染特異性免疫系統尚未充分發育的稚苗期，無法使用常規免疫法來防治。因此，制備抗NNV的單克隆抗體，對于快速診斷病原并及時切斷傳播途徑、鑒定病毒感染的受體靶點、跟蹤病毒的復制過程、檢測病毒的變異及分型等，均具有重要現實意義。

發明內容

本發明的一個目的是提供一種抗NNV的單克隆抗體，用于快速檢測NNV的存在，為精確診斷魚體內是否攜帶NNV提供重要的免疫學工具。

本發明的另一個目的是提供一種上述抗NNV的單克隆抗體的制備方法。