[發明專利]一種抗神經壞死病毒的單克隆抗體及其制備方法

在審

• 申請號: 202010148560.7
• 申請日: 2020-03-05
• 公開（公告）號: CN111378033A
• 公開（公告）日: 2020-07-07
• 發明（設計）人: 邢婧;張志琪;戰文斌;唐小千;繩秀珍;遲恒
• 申請（專利權）人: 中國海洋大學
• 主分類號: C07K16/10
• 分類號: C07K16/10;C12N5/20;G01N33/569
• 代理公司: 青島海昊知識產權事務所有限公司 37201
• 代理人: 王鐸

1.一種抗神經壞死病毒的單克隆抗體，其特征在于：所述的單克隆抗體是由名稱為：雜交瘤細胞株NNV-CP-3D11，保藏號為：CCTCC NO：C202037，保藏單位為：中國典型培養物保藏中心，地址：湖北省武漢市武漢大學，保藏日期為：2020年01月15日的雜交瘤細胞分泌的。

2.如權利要求1所述抗神經壞死病毒的單克隆抗體，其特征在于：所述雜交瘤細胞株NNV-CP-3D11是以神經壞死病毒衣殼蛋白多肽-血藍蛋白復合物作為抗原制備的。

3.如權利要求2所述抗神經壞死病毒的單克隆抗體，其特征在于：所述神經壞死病毒衣殼蛋白多肽的氨基酸序列結構為：²⁴RRRANNRRRSNRTDAP³⁸。

4.如權利要求1所述抗神經壞死病毒的單克隆抗體，其特征在于：所述單克隆抗體與濃縮的神經壞死病毒懸液40kDa蛋白發生特異性反應，顯示紫褐色條帶。

5.一種如權利要求1-4任意一項所述抗神經壞死病毒的單克隆抗體的制備方法，其特征在于它包括如下步驟：（1）通過分析神經壞死病毒衣殼蛋白抗原表位，選擇抗原性強的15個氨基酸序列：²⁴RRRANNRRRSNRTDAP³⁸作為抗原肽；（2）通過多肽合成技術合成并偶聯血藍蛋白載體；（3）以偶聯載體的多肽為抗原免疫Balb/C小鼠，采用細胞融合法制備雜交瘤細胞，經間接酶聯免疫吸附實驗、免疫印跡和間接免疫熒光實驗，篩選出穩定分泌抗神經壞死病毒的單克隆抗體的雜交瘤細胞株NNV-CP-3D11；（4）采用常規方法擴大培養上述所得到的雜交瘤細胞株，收集細胞培養上清液，經純化后得到抗神經壞死病毒的單克隆抗體。