[發(fā)明專利]一種高爾基體蛋白73的測定試劑盒及其化學(xué)發(fā)光測定方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 202010148039.3 | 申請日： | 2020-03-05 |
| 公開（公告）號： | CN111273033A | 公開（公告）日： | 2020-06-12 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 肖文峰;胡國茂;王國建 | 申請（專利權(quán)）人： | 北京森美希克瑪生物科技有限公司 |
| 主分類號： | G01N33/68 | 分類號： | G01N33/68;G01N33/543;G01N21/76 |
| 代理公司： | 北京超凡宏宇專利代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 11463 | 代理人： | 覃蛟 |
| 地址： | 100000 北京市北京經(jīng)濟*** | 國省代碼： | 北京;11 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 高爾基 蛋白 73 測定 試劑盒 及其 化學(xué) 發(fā)光 方法 | ||
1.一種高爾基體蛋白73的測定試劑盒，其特征在于，其包括磁微粒試劑、GP73結(jié)合抗體以及GP73標(biāo)記抗體；
所述磁微粒試劑包括由磁微粒與異硫氰酸熒光素抗體偶聯(lián)制成的磁微粒；
所述GP73結(jié)合抗體包括由GP73抗體與異硫氰酸熒光素偶聯(lián)制成的抗體；
所述GP73標(biāo)記抗體包括由吖啶類化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物標(biāo)記的GP73抗體。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的高爾基體蛋白73的測定試劑盒，其特征在于，所述磁微粒試劑通過異硫氰酸熒光素抗體與GP73結(jié)合抗體上的異硫氰酸熒光素結(jié)合成復(fù)合物的狀態(tài)。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的高爾基體蛋白73的測定試劑盒，其特征在于，所述吖啶類化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物包括吖啶酯和/或吖啶磺酰胺；
優(yōu)選地，所述吖啶類化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物為吖啶酯；
優(yōu)選地，所述GP73抗體為抗GP73蛋白的單克隆抗體。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的高爾基體蛋白73的測定試劑盒，其特征在于，當(dāng)磁微粒與異硫氰酸熒光素抗體偶聯(lián)時，磁微粒與異硫氰酸熒光素的抗體的配比為(90～110)：1；
優(yōu)選地，所述磁微粒的直徑為0.5～3μm；
優(yōu)選地，所述磁微粒的表面含有羧基、氨基和甲苯磺酰基中的任意一種或多種。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的高爾基體蛋白73的測定試劑盒，其特征在于，當(dāng)GP73抗體與異硫氰酸熒光素偶聯(lián)時，所述GP73抗體與異硫氰酸熒光素的配比為1mg：(18～22)μg；
優(yōu)選地，當(dāng)GP73抗體與異硫氰酸熒光素偶聯(lián)時，GP73抗體為由每1mg抗體加入0.8～1.2ml的緩沖液A中混合而成的抗體溶液；
優(yōu)選地，當(dāng)GP73抗體與異硫氰酸熒光素偶聯(lián)時，反應(yīng)溫度為2～8℃，反應(yīng)時間為18～24h；
優(yōu)選地，所述緩沖液A為濃度為0.45～0.55M、pH 8.8～9.2的CB緩沖液。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的高爾基體蛋白73的測定試劑盒，其特征在于，當(dāng)吖啶類化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物標(biāo)記GP73抗體時，GP73抗體與吖啶類化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物的配比為1mg：(10～20)μg；
優(yōu)選地，當(dāng)吖啶類化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物標(biāo)記的GP73抗體時，GP73抗體為由每1mg抗體加入0.8～1.2ml的緩沖液B中混合而成的抗體溶液；
優(yōu)選地，當(dāng)吖啶類化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物標(biāo)記的GP73抗體時，反應(yīng)溫度為2～8℃，反應(yīng)時間為20～40min；
優(yōu)選地，所述緩沖液B為濃度為0.08～0.12M、pH 8.8～9.2的CB緩沖液。
7.根據(jù)權(quán)利要求1～6任一項所述的高爾基體蛋白73的測定試劑盒，其特征在于，所述測定試劑盒還包括以下輔助試劑中的任意一種或多種：GP73校準(zhǔn)品、預(yù)激發(fā)液、激發(fā)液以及清洗工作液；
優(yōu)選地，所述預(yù)激發(fā)液為吖啶酯預(yù)激發(fā)液，所述激發(fā)液為吖啶酯激發(fā)液；
優(yōu)選地，所述GP73校準(zhǔn)品由校準(zhǔn)品稀釋液與不同標(biāo)量的GP73蛋白混合組成；
優(yōu)選地，所述清洗工作液為含吐溫20的磷酸鹽緩沖液。
8.一種高爾基體蛋白73的化學(xué)發(fā)光測定方法，其特征在于，其包括采用如權(quán)利要求1～7任一項所述的高爾基體蛋白73的測定試劑盒對待測樣品進行測定。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的高爾基體蛋白73的化學(xué)發(fā)光測定方法，其特征在于，所述測定方法不以疾病的診斷或治療為目的。
10.根據(jù)權(quán)利要求8或9所述的高爾基體蛋白73的化學(xué)發(fā)光測定方法，其特征在于，所述化學(xué)發(fā)光測定方法包括以下步驟：
將待測樣品或校準(zhǔn)品，與所述測定試劑盒中的所述磁微粒試劑和GP73結(jié)合抗體在36～38℃的條件下混合；
將混合后得到的混合物與所述測定試劑盒的GP73標(biāo)記抗體在36～38℃的條件下混合；
優(yōu)選地，待測樣品或校準(zhǔn)品與所述磁微粒試劑和GP73結(jié)合抗體的混合時間為10～20min；
優(yōu)選地，混合物與GP73標(biāo)記抗體的混合時間為10～20min；
優(yōu)選地，所述化學(xué)發(fā)光測定方法包括將與所述測定試劑盒的GP73標(biāo)記抗體反應(yīng)后的混合物經(jīng)清洗工作液洗滌后，加入吖啶酯預(yù)激發(fā)液和吖啶酯激發(fā)液，檢測發(fā)光值。
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