[發(fā)明專(zhuān)利]一種利用間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基聯(lián)合纖維連接蛋白進(jìn)行妊娠紋修復(fù)的混合液制備方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010146201.8
• 申請(qǐng)日: 2020-03-25
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN111097041A
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-05-05
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 白晉
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 白晉
• 主分類(lèi)號(hào): A61K38/39
• 分類(lèi)號(hào): A61K38/39;A61K35/28;A61P17/00
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本發(fā)明涉及妊娠紋修復(fù)領(lǐng)域，尤其是涉及一種利用間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基聯(lián)合纖維連接蛋白進(jìn)行妊娠紋修復(fù)的混合液制備方法，其主要包括間充質(zhì)干細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基的制備及干細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基上清的制備，本發(fā)明將間充質(zhì)干細(xì)胞的無(wú)血清培養(yǎng)基上清與連接纖維蛋白聯(lián)合使用，間充質(zhì)干細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基上清能夠使真皮層膠原纖維和彈力纖維增生并重新排列，膠原蛋白有序沉積，在此過(guò)程中，連接纖維蛋白能夠促進(jìn)細(xì)胞移動(dòng)并且為細(xì)胞附著提供基礎(chǔ)，為這一過(guò)程起到良好的介導(dǎo)和輔助作用，能夠有效促進(jìn)女性身體部位妊娠紋的修復(fù)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及妊娠紋修復(fù)領(lǐng)域，尤其是涉及一種利用間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基聯(lián)合纖維連接蛋白進(jìn)行妊娠紋修復(fù)的混合液制備方法。

背景技術(shù)

妊娠紋是女性在妊娠過(guò)程中出現(xiàn)的一種皮膚損傷，多發(fā)于腰腹部、臀部、大腿、乳房等部位。早期表現(xiàn)為呈淡紅色的波浪形條紋，與皮膚紋理走向相同，之后色素脫失、萎縮，最終呈白色或銀白色的條紋，大多無(wú)自覺(jué)癥狀。妊娠紋的發(fā)病原因目前沒(méi)有確切的結(jié)論，有研究表明妊娠過(guò)程中皮膚張力與體內(nèi)激素變化具有高度相關(guān)性，另外還有很多因素參與妊娠紋的發(fā)生、發(fā)展，有研究報(bào)道妊娠紋與個(gè)體的遺傳易感性有關(guān)。妊娠紋嚴(yán)重影響了女性身體的局部美觀，給罹患女性帶來(lái)很大的精神心理壓力，沒(méi)有一個(gè)女性希望妊娠紋影響自己的美麗，因此很多的女性不斷尋找妊娠紋的去除方法來(lái)去除其身上難看的妊娠紋。妊娠紋的治療始終是醫(yī)學(xué)界研究的熱點(diǎn)，目前主要治療妊娠紋的方法有光電儀器治療、針刺治療以及聯(lián)合治療等方法。激光治療包括點(diǎn)陣激光和非點(diǎn)陣激光；此外還有射頻治療和超聲波治療等常用方法，上述方法治療效果一般，容易對(duì)人體皮膚造成二次傷害，因此，目前尚沒(méi)有一種方法可以作為治療妊娠紋的標(biāo)準(zhǔn)方法。

間充質(zhì)干細(xì)胞廣泛存在于全身結(jié)締組織和器官間質(zhì)中，以骨髓組織中含量最為豐富，也可從胎兒臍血中分離得到，此外還存在于胎盤(pán)，羊水、臍靜脈內(nèi)皮下層、外周血及肝臟、脂肪、肌肉、皮膚等多種組織中。間充質(zhì)干細(xì)胞具有高度增殖、自我更新和多向分化潛能，間充質(zhì)干細(xì)胞不僅能夠向多種組織和細(xì)胞分化，而且易于分離、培養(yǎng)、擴(kuò)增，易于外源基因的導(dǎo)入和表達(dá)，在體外長(zhǎng)期培養(yǎng)過(guò)程中始終保持多向分化的潛能。有研究證明間充質(zhì)干細(xì)胞 MSCs (hESC-MSC)可向其培養(yǎng)基中分泌多種獨(dú)特的產(chǎn)物。MSCs可被趨化因子等小分子物質(zhì)聚集到皮膚損傷部位，進(jìn)而在損傷部位的微環(huán)境介導(dǎo)下MSCs向表皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞分化，達(dá)到重構(gòu)皮膚的目的。傳統(tǒng)的人體間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基均采用添加10％的胎牛血清，但是胎牛血清為動(dòng)物來(lái)源物質(zhì)，會(huì)給干細(xì)胞的生產(chǎn)帶來(lái)多種不利因素，如不同批次產(chǎn)品差異大，來(lái)源不穩(wěn)定，需要設(shè)計(jì)工藝進(jìn)行異源物質(zhì)的清除，阻礙了間充質(zhì)干細(xì)胞臨床研究轉(zhuǎn)化為實(shí)際投向市場(chǎng)的產(chǎn)品，因此在近些年的國(guó)家政策法規(guī)中如《干細(xì)胞制劑質(zhì)量控制指導(dǎo)原則》及《細(xì)胞治療產(chǎn)品研究與評(píng)價(jià)指導(dǎo)原則》中均對(duì)動(dòng)物來(lái)源物質(zhì)做出了規(guī)定：應(yīng)盡量避免應(yīng)用動(dòng)物來(lái)源物質(zhì)如牛血清，因此，各大研究機(jī)構(gòu)也紛紛進(jìn)行了無(wú)血清培養(yǎng)基的研制開(kāi)發(fā)。體外培養(yǎng)的MSCs可向培養(yǎng)基中分泌一些生長(zhǎng)因子、趨化因子等小分子物質(zhì)和囊泡等，這些小分子物質(zhì)能直接參與皮膚再生和重建誘發(fā)真皮層內(nèi)的創(chuàng)傷愈合反應(yīng)，使真皮層膠原纖維和彈力纖維增生并重新排列，膠原蛋白有序沉積，增加真皮層厚度和密度，提高皮膚的彈性，改善受創(chuàng)部位的皮膚外觀。纖維連接蛋白 fibronectin（英文縮寫(xiě)FN）是1974年國(guó)外開(kāi)始研究發(fā)現(xiàn)的一種高分子糖蛋白，具有多種生物學(xué)功能。FN廣泛存在于動(dòng)物組織和組織液中，分子量約為450KD，具有多種生物活性。大量國(guó)內(nèi)外的研究結(jié)果證明，F(xiàn)N分子在進(jìn)化過(guò)程中保守性很強(qiáng)。有研究表明，在成纖維細(xì)胞系中添加FN，能夠促進(jìn)細(xì)胞排列有序，細(xì)胞重疊減少，細(xì)胞間質(zhì)形成增加，細(xì)胞貼壁率增加，而且還能夠增強(qiáng)細(xì)胞的代謝，且促使其維持正常的細(xì)胞形態(tài)。此前，F(xiàn)N已經(jīng)被應(yīng)用于皮膚創(chuàng)口修復(fù)的臨床試驗(yàn)中，近些年來(lái)，隨著皮膚護(hù)理和整形行業(yè)的發(fā)展，F(xiàn)N應(yīng)用于皮膚疤痕的消除領(lǐng)域的研究也日漸火熱，有研究表明FN能夠促進(jìn)細(xì)胞與細(xì)胞，細(xì)胞與基質(zhì)的連接，即起到“體內(nèi)生物膠”的作用，F(xiàn)N上有特異性的結(jié)合膠原位點(diǎn)，與膠原結(jié)合后FN作為膠原的沉積構(gòu)成基質(zhì)支架，利于細(xì)胞與間質(zhì)的結(jié)合，并成為細(xì)胞移動(dòng)和附著的基礎(chǔ)物質(zhì)，并且還能對(duì)細(xì)胞形成包裹和包被進(jìn)而促進(jìn)細(xì)胞集落生長(zhǎng)，這些功能對(duì)于人皮膚疤痕的修復(fù)具有重要作用。

發(fā)明內(nèi)容