[發(fā)明專利]一種利用間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基聯(lián)合纖維連接蛋白進(jìn)行妊娠紋修復(fù)的混合液制備方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 202010146201.8
• 申請日: 2020-03-25
• 公開（公告）號(hào): CN111097041A
• 公開（公告）日: 2020-05-05
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 白晉
• 申請（專利權(quán)）人: 白晉
• 主分類號(hào): A61K38/39
• 分類號(hào): A61K38/39;A61K35/28;A61P17/00
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本發(fā)明涉及妊娠紋修復(fù)領(lǐng)域，尤其是涉及一種利用間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基聯(lián)合纖維連接蛋白進(jìn)行妊娠紋修復(fù)的混合液制備方法，其主要包括間充質(zhì)干細(xì)胞無血清培養(yǎng)基的制備及干細(xì)胞無血清培養(yǎng)基上清的制備，本發(fā)明將間充質(zhì)干細(xì)胞的無血清培養(yǎng)基上清與連接纖維蛋白聯(lián)合使用，間充質(zhì)干細(xì)胞無血清培養(yǎng)基上清能夠使真皮層膠原纖維和彈力纖維增生并重新排列，膠原蛋白有序沉積，在此過程中，連接纖維蛋白能夠促進(jìn)細(xì)胞移動(dòng)并且為細(xì)胞附著提供基礎(chǔ)，為這一過程起到良好的介導(dǎo)和輔助作用，能夠有效促進(jìn)女性身體部位妊娠紋的修復(fù)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及妊娠紋修復(fù)領(lǐng)域，尤其是涉及一種利用間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基聯(lián)合纖維連接蛋白進(jìn)行妊娠紋修復(fù)的混合液制備方法。

背景技術(shù)

妊娠紋是女性在妊娠過程中出現(xiàn)的一種皮膚損傷，多發(fā)于腰腹部、臀部、大腿、乳房等部位。早期表現(xiàn)為呈淡紅色的波浪形條紋，與皮膚紋理走向相同，之后色素脫失、萎縮，最終呈白色或銀白色的條紋，大多無自覺癥狀。妊娠紋的發(fā)病原因目前沒有確切的結(jié)論，有研究表明妊娠過程中皮膚張力與體內(nèi)激素變化具有高度相關(guān)性，另外還有很多因素參與妊娠紋的發(fā)生、發(fā)展，有研究報(bào)道妊娠紋與個(gè)體的遺傳易感性有關(guān)。妊娠紋嚴(yán)重影響了女性身體的局部美觀，給罹患女性帶來很大的精神心理壓力，沒有一個(gè)女性希望妊娠紋影響自己的美麗，因此很多的女性不斷尋找妊娠紋的去除方法來去除其身上難看的妊娠紋。妊娠紋的治療始終是醫(yī)學(xué)界研究的熱點(diǎn)，目前主要治療妊娠紋的方法有光電儀器治療、針刺治療以及聯(lián)合治療等方法。激光治療包括點(diǎn)陣激光和非點(diǎn)陣激光；此外還有射頻治療和超聲波治療等常用方法，上述方法治療效果一般，容易對人體皮膚造成二次傷害，因此，目前尚沒有一種方法可以作為治療妊娠紋的標(biāo)準(zhǔn)方法。

間充質(zhì)干細(xì)胞廣泛存在于全身結(jié)締組織和器官間質(zhì)中，以骨髓組織中含量最為豐富，也可從胎兒臍血中分離得到，此外還存在于胎盤，羊水、臍靜脈內(nèi)皮下層、外周血及肝臟、脂肪、肌肉、皮膚等多種組織中。間充質(zhì)干細(xì)胞具有高度增殖、自我更新和多向分化潛能，間充質(zhì)干細(xì)胞不僅能夠向多種組織和細(xì)胞分化，而且易于分離、培養(yǎng)、擴(kuò)增，易于外源基因的導(dǎo)入和表達(dá)，在體外長期培養(yǎng)過程中始終保持多向分化的潛能。有研究證明間充質(zhì)干細(xì)胞 MSCs (hESC-MSC)可向其培養(yǎng)基中分泌多種獨(dú)特的產(chǎn)物。MSCs可被趨化因子等小分子物質(zhì)聚集到皮膚損傷部位，進(jìn)而在損傷部位的微環(huán)境介導(dǎo)下MSCs向表皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞分化，達(dá)到重構(gòu)皮膚的目的。傳統(tǒng)的人體間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基均采用添加10％的胎牛血清，但是胎牛血清為動(dòng)物來源物質(zhì)，會(huì)給干細(xì)胞的生產(chǎn)帶來多種不利因素，如不同批次產(chǎn)品差異大，來源不穩(wěn)定，需要設(shè)計(jì)工藝進(jìn)行異源物質(zhì)的清除，阻礙了間充質(zhì)干細(xì)胞臨床研究轉(zhuǎn)化為實(shí)際投向市場的產(chǎn)品，因此在近些年的國家政策法規(guī)中如《干細(xì)胞制劑質(zhì)量控制指導(dǎo)原則》及《細(xì)胞治療產(chǎn)品研究與評(píng)價(jià)指導(dǎo)原則》中均對動(dòng)物來源物質(zhì)做出了規(guī)定：應(yīng)盡量避免應(yīng)用動(dòng)物來源物質(zhì)如牛血清，因此，各大研究機(jī)構(gòu)也紛紛進(jìn)行了無血清培養(yǎng)基的研制開發(fā)。體外培養(yǎng)的MSCs可向培養(yǎng)基中分泌一些生長因子、趨化因子等小分子物質(zhì)和囊泡等，這些小分子物質(zhì)能直接參與皮膚再生和重建誘發(fā)真皮層內(nèi)的創(chuàng)傷愈合反應(yīng)，使真皮層膠原纖維和彈力纖維增生并重新排列，膠原蛋白有序沉積，增加真皮層厚度和密度，提高皮膚的彈性，改善受創(chuàng)部位的皮膚外觀。纖維連接蛋白 fibronectin（英文縮寫FN）是1974年國外開始研究發(fā)現(xiàn)的一種高分子糖蛋白，具有多種生物學(xué)功能。FN廣泛存在于動(dòng)物組織和組織液中，分子量約為450KD，具有多種生物活性。大量國內(nèi)外的研究結(jié)果證明，F(xiàn)N分子在進(jìn)化過程中保守性很強(qiáng)。有研究表明，在成纖維細(xì)胞系中添加FN，能夠促進(jìn)細(xì)胞排列有序，細(xì)胞重疊減少，細(xì)胞間質(zhì)形成增加，細(xì)胞貼壁率增加，而且還能夠增強(qiáng)細(xì)胞的代謝，且促使其維持正常的細(xì)胞形態(tài)。此前，F(xiàn)N已經(jīng)被應(yīng)用于皮膚創(chuàng)口修復(fù)的臨床試驗(yàn)中，近些年來，隨著皮膚護(hù)理和整形行業(yè)的發(fā)展，F(xiàn)N應(yīng)用于皮膚疤痕的消除領(lǐng)域的研究也日漸火熱，有研究表明FN能夠促進(jìn)細(xì)胞與細(xì)胞，細(xì)胞與基質(zhì)的連接，即起到“體內(nèi)生物膠”的作用，F(xiàn)N上有特異性的結(jié)合膠原位點(diǎn)，與膠原結(jié)合后FN作為膠原的沉積構(gòu)成基質(zhì)支架，利于細(xì)胞與間質(zhì)的結(jié)合，并成為細(xì)胞移動(dòng)和附著的基礎(chǔ)物質(zhì)，并且還能對細(xì)胞形成包裹和包被進(jìn)而促進(jìn)細(xì)胞集落生長，這些功能對于人皮膚疤痕的修復(fù)具有重要作用。

發(fā)明內(nèi)容