[發明專利]一種利用間充質干細胞培養基聯合纖維連接蛋白進行妊娠紋修復的混合液制備方法

在審

• 申請號: 202010146201.8
• 申請日: 2020-03-25
• 公開（公告）號: CN111097041A
• 公開（公告）日: 2020-05-05
• 發明（設計）人: 白晉
• 申請（專利權）人: 白晉
• 主分類號: A61K38/39
• 分類號: A61K38/39;A61K35/28;A61P17/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種利用間充質干細胞培養基聯合纖維連接蛋白進行妊娠紋修復的混合液制備方法，其特征在于，主要包括間充質干細胞無血清培養基的制備及干細胞無血清培養基上清的制備，所述的間充質干細胞無血清培養基的制備過程如下：向DMEM培養基中添加地塞米松、氫化可的松、乙醇胺、FGF 、EGF、亞硒酸鈉、胰島素、β-巰基乙醇、轉鐵蛋白、維生素C 、1×的L-Glu、1×的NEAA及1×的Antibiotic-Antimycotic后進行過濾除菌即可得到干細胞無血清培養基；

所述的干細胞無血清培養基上清的制備過程如下：

步驟一：首先將臍帶剪成小段，并剝離臍帶小段的動、靜脈；

步驟二：將上步驟中剝離完成后的臍帶小段用無菌PBS清洗，直至肉眼不可見血絲；

步驟三：將上步驟清洗后的小段臍帶剪碎后移入細胞培養皿中，使用含胎牛血清的α-MEM完全培養基培養，待顯微鏡下細胞鋪滿培養皿面積的80%時，加入胰蛋白酶消化傳代；

步驟四：細胞傳至第3代對數生長期時將細胞一部分冷凍保存于液氮中，另一部分傳代至干細胞無血清培養基中培養，培養后通過離心機采用低速離心法獲得干細胞無血清培養基上清，分裝后保存，留待后續使用；

將連接纖維蛋白與上述干細胞無血清培養基上清的進行混合即可得到用于修復妊娠紋的溶液。

2.根據權利要求1所述的一種利用間充質干細胞培養基聯合纖維連接蛋白進行妊娠紋修復的混合液制備方法，其特征在于，進一步的，在制備間充質干細胞無血清培養基時向DMEM培養基中添加的跟個組分的含量為：地塞米松30nM/L、氫化可的松9 ug/mL、乙醇胺1.0ug/mL、FGF 40 ng/mL、EGF 30 ng/mL、亞硒酸鈉0.1 ug/mL、胰島素1 ug/mL、β-巰基乙醇20nM、轉鐵蛋白3.0 ug/mL、維生素C 9.0 ug/mL、1×的L-Glu、1×的NEAA和1×的Antibiotic-Antimycotic。

3.根據權利要求1所述的一種利用間充質干細胞培養基聯合纖維連接蛋白進行妊娠紋修復的混合液制備方法，其特征在于，進一步的，上述步驟一中，首先將臍帶剪成2-3cm小段，并剝離臍帶小段的動、靜脈。

4.根據權利要求1所述的一種利用間充質干細胞培養基聯合纖維連接蛋白進行妊娠紋修復的混合液制備方法，其特征在于，進一步的，上述步驟二中，將上步驟中剝離完成后的臍帶小段用無菌PBS清洗2-3次。

5.根據權利要求1所述的一種利用間充質干細胞培養基聯合纖維連接蛋白進行妊娠紋修復的混合液制備方法，其特征在于，進一步的，上述步驟三中，將上步驟清洗后的小段臍帶剪碎后移入細胞培養皿中，使用含10%胎牛血清的α-MEM完全培養基培養，待細胞鋪滿培養皿面積的80%時，加入0.25 %胰蛋白酶消化傳代。

6.根據權利要求1所述的一種利用間充質干細胞培養基聯合纖維連接蛋白進行妊娠紋修復的混合液制備方法，其特征在于，進一步的，上述步驟四中，細胞傳至第3代對數生長期時將細胞一部分冷凍保存于液氮中，另一部分傳代至干細胞無血清培養基中培養，培養2-3天后通過離心機采用低速離心法獲得干細胞無血清培養基上清，分裝后在4℃環境下進行保存，留待后續使用。