[發明專利]一種基于循環酶速率法測定HCY的試劑盒及其制備使用方法

在審

• 申請號: 202010145870.3
• 申請日: 2020-03-05
• 公開（公告）號: CN111304283A
• 公開（公告）日: 2020-06-19
• 發明（設計）人: 芮雙印;任傳伍
• 申請（專利權）人: 安徽大千生物工程有限公司
• 主分類號: C12Q1/48
• 分類號: C12Q1/48;C12Q1/34;C12Q1/32
• 代理公司: 合肥興東知識產權代理有限公司 34148
• 代理人: 王偉

1.一種基于循環酶速率法測定HCY的試劑盒，其特征在于，包括試劑R1和試劑R2；

所述試劑R1包括的成分及相應含量為：緩沖液5-10g/L，S-腺苷甲硫氨酸5-15g/L，NADH10-30g/L，三(2-羧乙基)膦氯化氫10-25g/L，防腐劑1-3mL/L，穩定劑3-14g/L，表面活性劑0.5-2.5mL/L，溶劑為純化水；

所述試劑R2包括的成分及相應含量為：緩沖液2-10g/L，無機鹽5-15g/L，S-腺苷同型半胱氨酸水解酶2-8.5g/L，a-酮戊二酸5-10g/L，谷氨酸脫氫酶2-11g/L，HCY甲基轉移酶0.5-5g/L，腺苷脫氨酶0.5-1.5g/L，防腐劑1-3mL/L，穩定劑20-46g/L，表面活性劑1-7mL/L，溶劑為純化水。

2.根據權利要求1所述的基于循環酶速率法測定HCY的試劑盒，其特征在于，在所述試劑R1中：

所述緩沖液為三羥甲基氨基甲烷緩沖液、甘氨酸緩沖液、2-(N-嗎啡啉)乙磺酸緩沖液、3-(N-嗎啉基)-2-羥基丙磺酸緩沖液中的一種；

所述防腐劑為Proclin300、慶大霉素和硫柳汞中的一種；

所述穩定劑為BSA、甘氨酸和蔗糖中的一種；

所述表面活性劑為吐溫-20、吐溫-80、曲拉通X-100中的一種或多種。

3.根據權利要求1所述的基于循環酶速率法測定HCY的試劑盒，其特征在于，所述試劑R1的pH為6.1-6.6。

4.根據權利要求1所述的基于循環酶速率法測定HCY的試劑盒，其特征在于，在所述試劑R2中：

所述緩沖液為三羥甲基氨基甲烷緩沖液、甘氨酸緩沖液、3-(N-嗎啉基)-2-羥基丙磺酸緩沖液中的一種；

所述無機鹽為氯化鈉、氯化鎂、氯化鉀、氯化鋅、氯化鈣中的一種或多種；

所述防腐劑為Proclin300、慶大霉素和硫柳汞中的一種；

所述穩定劑為BSA、甘氨酸和蔗糖中的一種；

所述表面活性劑為吐溫-20、吐溫-80、曲拉通X-100中的一種或多種。

5.根據權利要求1所述的基于循環酶速率法測定HCY的試劑盒，其特征在于，所述試劑R2的pH為6.5-7.7。

6.一種如權利要求1-5任一所述的基于膠乳增強免疫比濁法測定HCY的試劑的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)配制試劑R1：

按照試劑R1的組分含量稱取各原料，并置于裝有0.7L純化水的燒杯中，依次稱取溶解，攪拌均勻；然后，將pH調節到目標值；最后，將溶液轉移到容量瓶中定溶至1L，再用0.22um濾膜過濾，貼上標簽，置于2-8℃保存；

(2)配制試劑R2：

按照試劑R2的組分含量稱取各原料，并置于裝有0.7L純化水的燒杯中，依次稱取溶解，攪拌均勻；然后，將pH調節到目標值；最后，將溶液轉移到容量瓶中定溶至1L，再用0.22um濾膜過濾，貼上標簽，置于2-8℃保存。

7.一種如權利要求1-5任一所述的基于循環酶速率法測定HCY的試劑盒的使用方法，其特征在于，包括如下具體步驟：

(1)吸取13μL樣本，加入240μL試劑R1，37℃孵育3-5min；

(2)再加入60μL試劑R2，混勻；

(3)37℃孵育180s，在主波長340nm/副波長405nm下連續監測2分鐘吸光度變化，計算△A/min，根據ΔA測算樣本中HCY含量。