[發(fā)明專利]融合毒素VEGF165b

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010145502.9
• 申請日: 2020-03-05
• 公開（公告）號: CN113354738B
• 公開（公告）日: 2022-09-09
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 孫紅琰;邵帥;劉海昌;胡棟
• 申請（專利權(quán)）人: 紹興德方華生物技術(shù)有限公司;孫紅琰;邵帥
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/62;C12N15/70;C12N1/21;A61K38/18;A61K38/16;A61P35/00;A61P27/02;C12R1/19
• 代理公司: 北京尚誠知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11322
• 代理人: 魯兵

本發(fā)明公開了一種融合毒素VEGF_165b/mGEL及其編碼基因與應(yīng)用，屬于生物制藥領(lǐng)域。提供的融合毒素VEGF_165b/mGEL包含VEGF₁₆₅抑制性剪接異構(gòu)體VEGF_165b與白樹毒Gelonin突變體mGEL，其能夠同時抑制新生血管形成和破壞新生血管。以該融合毒素為活性成分可以制備成治療惡性腫瘤、新生血管性眼病等多種新生血管依賴性疾病的藥物，能夠在醫(yī)學(xué)及生物制藥領(lǐng)域發(fā)揮重要作用。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物制藥領(lǐng)域，具體涉及一種融合毒素VEGF_165b/mGEL及其編碼基因與應(yīng)用，尤其涉及一種VEGF₁₆₅抑制性剪接異構(gòu)體與白樹毒突變體融合毒素及其編碼基因、制備方法與應(yīng)用，尤其是在治療惡性腫瘤、新生血管性眼病等新生血管依賴性疾病中的應(yīng)用。

背景技術(shù)

新生血管依賴性疾病是包括惡性腫瘤(例如肺癌、胃腸癌等)、新生血管性眼病(例如濕性視網(wǎng)膜黃斑變性等)等一系列疾病的總稱。惡性腫瘤生長依賴于新生血管形成，如果僅靠彌散作用獲取營養(yǎng)，腫瘤大小不會超過2mm³，因而將處于靜息狀態(tài)。然而，腫瘤細胞在生長過程中會通過自分泌多種細胞因子促進周圍新生血管形成。新生血管長入前，腫瘤呈線性增長；新生血管長入后，腫瘤呈指數(shù)級生長。因此，抑制新生血管生成或破壞已有新生血管網(wǎng)絡(luò)，就等同于切斷了腫瘤的營養(yǎng)供應(yīng)，使其停止生長、處于“休眠”狀態(tài)，并萎縮、凋亡、壞死，最終被機體清除。

新生血管性眼病主要包括角膜新生血管增生和虹膜新生血管增生：(1)正常角膜無血管，在佩戴角膜接觸鏡、眼外傷、感染性和免疫性眼病等病理狀態(tài)下，毛細血管從角膜緣血管網(wǎng)侵入，形成角膜新生血管。角膜新生血管結(jié)構(gòu)脆弱，易滲透，并常由于出血滲出及繼發(fā)的纖維化等導(dǎo)致失明。(2)虹膜新生血管增生常繼發(fā)于視網(wǎng)膜中央靜脈阻塞、糖尿病等眼其他部位疾病和全身性疾病，是導(dǎo)致失明和眼球摘除的常見原因。十年以上病史的糖尿病患者約50％并發(fā)視網(wǎng)膜病變。因此，抑制新生血管生成或破壞已有新生血管網(wǎng)絡(luò)，同樣也能有效控制并達到治療新生血管性眼病的目的。

血管內(nèi)皮細胞生長因子(VEGF)及其受體(VEGFR)家族在新生血管形成過程中發(fā)揮重要作用，是藥物設(shè)計的重要靶標(biāo)。人類VEGF由于mRNA的剪接而產(chǎn)生幾種不同的異構(gòu)體，即VEGF₁₂₁、VEGF₁₆₅、VEGF₁₈₉和VEGF₂₀₈，其中VEGF₁₂₁和VEGF₁₆₅為可溶性的細胞因子，具有促進血管內(nèi)皮細胞增殖、血管生成、增加血管通透性、加快血液流動等功能。VEGFR尤其是VEGFR2在新生血管內(nèi)皮細胞表面高表達，而在正常組織的血管內(nèi)皮細胞表達水平很低乃至幾乎無法檢測出，是特異性比較高的新生血管內(nèi)皮細胞的生物標(biāo)志。

已有研究表明，VEGF基因差異剪接后可產(chǎn)生促進血管生成的VEGF_xxx和抑制血管生成的VEGF_xxxb。在VEGF_xxxb家族中，VEGF_165b最有代表性，它一方面通過與VEGFR的高親和力結(jié)合拮抗VEGF₁₆₅等血管內(nèi)皮生長因子與其受體的結(jié)合，但不能激活血管內(nèi)皮細胞內(nèi)的信號傳導(dǎo)通路，使之成為VEGF拮抗劑，發(fā)揮抑制新生血管內(nèi)皮細胞的增殖和新生血管生成的作用。