[發(fā)明專利]融合毒素VEGF165b

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010145502.9
• 申請(qǐng)日: 2020-03-05
• 公開（公告）號(hào): CN113354738B
• 公開（公告）日: 2022-09-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 孫紅琰;邵帥;劉海昌;胡棟
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 紹興德方華生物技術(shù)有限公司;孫紅琰;邵帥
• 主分類號(hào): C07K19/00
• 分類號(hào): C07K19/00;C12N15/62;C12N15/70;C12N1/21;A61K38/18;A61K38/16;A61P35/00;A61P27/02;C12R1/19
• 代理公司: 北京尚誠(chéng)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11322
• 代理人: 魯兵

1.一種融合毒素VEGF_165b/mGEL，其特征在于，所述融合毒素VEGF_165b/mGEL包含VEGF₁₆₅抑制性剪接異構(gòu)體VEGF_165b與白樹毒Gelonin突變體mGEL，并能夠針對(duì)新生血管依賴性疾病同時(shí)抑制新生血管生成和破壞新生血管網(wǎng)絡(luò)；

所述融合毒素VEGF_165b/mGEL的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。

2.權(quán)利要求1所述的融合毒素VEGF_165b/mGEL的編碼基因，其特征在于，所述編碼基因的核苷酸序列是下述核苷酸序列之一：

1）SEQ ID NO：2所示的核苷酸序列；

2）編碼SEQ ID NO：1的核苷酸序列。

3.一種重組表達(dá)載體，其特征在于，所述重組表達(dá)載體包含權(quán)利要求2所述的編碼基因，用于表達(dá)權(quán)利要求1所述的融合毒素VEGF_165b/mGEL。

4.一種轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系或宿主菌，其特征在于，所述轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系或宿主菌中包含權(quán)利要求2所述的編碼基因或權(quán)利要求3所述的重組表達(dá)載體，用于表達(dá)權(quán)利要求1所述的融合毒素VEGF_165b/mGEL。

5.一種新生血管依賴性疾病的治療藥物，其包含權(quán)利要求1所述的融合毒素VEGF_165b/mGEL或權(quán)利要求2所述的編碼基因。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的新生血管依賴性疾病的治療藥物，其特征在于，所述新生血管依賴性疾病的治療藥物還包含以下中的一種或多種：藥學(xué)上可接受的載體、稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤(rùn)劑、崩解劑、吸收促進(jìn)劑、表面活性劑。

7.根據(jù)權(quán)利要求5或6所述的新生血管依賴性疾病的治療藥物，其特征在于，所述新生血管依賴性疾病包括惡性腫瘤、新生血管性眼病。

8.一種重組表達(dá)權(quán)利要求1所述的融合毒素VEGF_165b/mGEL的方法，其包括以下步驟：

1）構(gòu)建權(quán)利要求4所述的轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系或宿主菌，并培養(yǎng)該轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系或宿主菌；

2）從轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系或宿主菌的培養(yǎng)基中或細(xì)胞中分離純化蛋白，得到融合毒素VEGF_165b/mGEL。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于，所述方法具體包括以下步驟：

a）構(gòu)建含有權(quán)利要求2所述的編碼基因的重組表達(dá)載體；

b）將所述重組表達(dá)載體轉(zhuǎn)化入轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系或宿主菌，并進(jìn)行培養(yǎng)表達(dá)，獲得融合蛋白DSS-VEGF_165b/mGEL；

c）使用工具酶ULP1切除融合蛋白DSS-VEGF_165b/mGEL的DSS標(biāo)簽，純化獲得融合毒素VEGF_165b/mGEL。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其特征在于，步驟c）中工具酶ULP1與融合蛋白DSS-VEGF_165b/mGEL的用量比例關(guān)系為1：（100-150）。

11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法，其特征在于，步驟c）中工具酶ULP1與融合蛋白DSS-VEGF_165b/mGEL的用量比例關(guān)系為1:100。