[發明專利]一種植物外泌體的提取方法

在審

• 申請號: 202010144341.1
• 申請日: 2020-03-04
• 公開（公告）號: CN113355272A
• 公開（公告）日: 2021-09-07
• 發明（設計）人: 潘麗英;胡金波;鄧林濤
• 申請（專利權）人: 上海察雅生物科技有限公司
• 主分類號: C12N5/04
• 分類號: C12N5/04
• 代理公司: 上海宏京知識產權代理事務所(普通合伙) 31297
• 代理人: 鄧文武

1.一種植物外泌體的提取方法，其特征在于，包括如下步驟：

S1，取植物的地上部分，切小段，浸入NA溶液；

S2，從S1的NA溶液中取出葉片，PBS沖洗后，再浸入VIB1溶液中；

S3，將葉片從S2的VIB1溶液轉移至VIB2溶液中；

S4，將S3的葉片轉移至LY溶液中，搖晃以形成混合體系；

S5，將S4中的混合體系進行濾膜過濾，濾液離心兩次，收集上清液；

S6，對S5收集后的上清液再次離心，收集上清液；

S7，對S6獲得上清液進行離心，去除上清液，獲得水稻外泌體；

其中，NA溶液由400mM NaHCO₃和400mM Na₂CO₃組成；VIB1溶液由20mM MES、2mM CaCl₂和0.1M NaCl組成，VIB1溶液的pH為6.0；VIB2溶液由20mM MES、2mM CaCl₂和0.5M NaCl組成，VIB2溶液的pH為6.0；LY溶液由質量分數為1％的纖維素酶和0.5％的果膠酶組成，LY溶液的pH為6.0。

2.如權利要求1所述的植物外泌體的提取方法，其特征在于，所述S1中的植物為單子葉植物。

3.如權利要求2所述的植物外泌體的提取方法，其特征在于，所述S1中的植物為水稻。

4.如權利要求1所述的植物外泌體的提取方法，其特征在于，所述S1中的浸入時間為3min、所述S2中的浸入時間為5min、所述S3中的浸入時間為10min、所述S4中的搖晃時間為5min。

5.如權利要求1所述的植物外泌體的提取方法，其特征在于，所述S5中濾膜的尺寸為0.22μm。

6.如權利要求1所述的植物外泌體的提取方法，其特征在于，所述S5中兩次離心均在4000g、4℃下離心10分鐘。

7.如權利要求1所述的植物外泌體的提取方法，其特征在于，所述S6中離心在10000g、4℃下離心30分鐘。

8.如權利要求1所述的植物外泌體的提取方法，其特征在于，所述S7在140000g、4℃下離心1小時。