[發明專利]新型冠狀病毒2019-nCoV核酸試劑盒和病毒核酸采集方法

在審

• 申請號: 202010141882.9
• 申請日: 2020-03-04
• 公開（公告）號: CN111378783A
• 公開（公告）日: 2020-07-07
• 發明（設計）人: 陳偉;胡立強;鄭小小;王翔
• 申請（專利權）人: 杭州美中疾病基因研究院有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6851
• 代理公司: 杭州九洲專利事務所有限公司 33101
• 代理人: 陳繼亮

本發明公開一種新型冠狀病毒2019?nCoV核酸試劑盒和病毒核酸采集方法，根據新型冠狀病毒2019?nCoV ORF1ab和N基因作為擴增靶區域，設計特異性引物及熒光探針用于樣品中新型冠狀病毒2019?nCoV核酸的檢測；將配制好的Super premix反應液A結合Super premix反應液B和C，采用一步法對2019?nCoV核酸RNA進行Digital PCR絕對定量，將稀釋后的陽性病毒樣品RNA進行Digital PCR檢測。本發明的有益效果為：通過新型病毒核酸采集法，再結合Digital PCR探針法，提高新型冠狀病毒2019?nCoV感染的核酸陽性檢出率，確保過程規范、標準，降低人為不規范操作對檢測結果造成的影響，保證結果的可靠性，同時避免痰液和咽拭子取樣結合實時熒光PCR法檢測帶來的假陰性結果。

技術領域

本發明涉及檢測試劑盒領域，主要是一種新型冠狀病毒2019-nCoV核酸試劑盒和病毒核酸采集方法。

背景技術

2019新型冠狀病毒(2019novel coronavirus，2019-nCoV)，于2020年1月12日被世界衛生組織(World Health Organization,WHO)命名。可靠的實驗室診斷是促進公共衛生干預措施的首要任務。在急性呼吸道感染中，實時PCR、即RT-PCR通常用于檢測呼吸道分泌物中的致病病毒。

目前臨床上主要采用實時熒光PCR法檢測2019-nCoV核酸(開發讀碼框1ab和核殼蛋白)來對病例進行早期確診，為陽性才能確診。所來源的樣品主要包括痰液以及帶有或不帶有病毒轉運介質的鼻拭子和咽拭子。而對于一些病毒載量豐度較低的樣品，熒光PCR法往往因為靈敏度的原因，會出現很多假陰性結果，實際臨床應用中也有很多報道，往往需要進行2-3次重復采樣，甚至有第6次咽拭子核酸檢測才陽性確診的患者，這不僅增加了醫務人員工作量，同時這些假陰性患者如若處理不當，很容易再次成為傳染源。造成檢出率低的原因，除了本身熒光PCR法的局限性，更重要的是因為新型冠狀病毒本身的特性、造成在咽部等上呼吸道病毒低度很低，因此我們需要一種更有效的病毒標本采集分法，同時結合Digital PCR可以直接檢測核酸分子的絕對數目，其靈敏度可低至單拷貝能精確的對低豐度樣品進行定量檢測的特點，從而可望大大提高檢出率。基于目前的流行病學調查，新型冠狀病毒2019-nCoV潛伏期為1-14天，多為3-7 天。更為重要的是潛伏期也具有傳染性，無癥狀感染者也可能成為傳染源。因此急需一種新型而高靈敏度的檢測方法，為疫情防控提供解決方案。

發明內容

本發明的目的在于克服現有技術存在的不足，而提供一種新型冠狀病毒2019-nCoV核酸試劑盒和病毒核酸采集方法。

本發明的目的是通過如下技術方案來完成的。一種Digital PCR探針法結合快速精準檢測新型冠狀病毒2019-nCoV核酸試劑盒，根據新型冠狀病毒2019-nCoV ORF1ab和N基因作為擴增靶區域，設計特異性引物及熒光探針用于樣品中新型冠狀病毒2019-nCoV核酸的檢測；

Target 1(ORF1ab):

正向引物(F)：CCCTGTGGGTTTTACACTTAA

反向引物(R)：ACGATTGTGCATCAGCTGA

熒光探針(P)：5'-HEX-CCGTCTGCGGTATGTGGAAAGGTTATGG-BHQ1-3'

Target 2(N基因):

正向引物(F)：GGGGAACTTCTCCTGCTAGAAT

反向引物(R)：CAGACATTTTGCTCTCAAGCTG

熒光探針(P)：5'-FAM-TTGCTGCTGCTTGACAGATT-BHQ1-3'。