[發明專利]用于檢測IL28B基因的方法、試劑盒、引物對及探針

有效

• 申請號: 202010141524.8
• 申請日: 2020-03-02
• 公開（公告）號: CN111118150B
• 公開（公告）日: 2023-10-20
• 發明（設計）人: 李洪波;張玉祥;邢軍芬;朱濱
• 申請（專利權）人: 上海百傲科技股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12Q1/6827;C12Q1/6837;C12N15/11
• 代理公司: 上海弼興律師事務所 31283
• 代理人: 薛琦;黃益澍

本發明公開了一種用于檢測IL28B基因的方法、試劑盒、引物對及探針。所述試劑盒包括PCR反應體系和基因芯片，所述PCR反應體系包括由一上游引物和一下游引物組成的引物對，所述基因芯片包括探針；所述引物對和所述探針選自如本發明所述的一種或多種組合。本發明的方法、試劑盒、引物對及探針用于檢測IL28B基因時，操作簡單、成本低廉，具有較高靈敏度、結果易讀精準。通過本發明所述的方法、試劑盒、引物對、探針及其應用檢測患者的IL28B基因型，主動預測慢性丙型肝炎患者對Peg?IFN/RBV標準治療方案的療效和預后，指導臨床醫生一開始選擇并確定藥物品種和方案，提供了一種簡便易行的解決方案。

技術領域

本發明涉及體外診斷試劑領域，尤其涉及一種用于檢測IL28B基因的方法、試劑盒、引物對及探針。

背景技術

血液作為一種重要的生物樣本，其內含有大量的DNA聚合酶抑制物質，如血紅素、雜蛋白、脂肪等。為了完成血液樣本核酸的PCR擴增，必須先從血液中對核酸物質進行純化處理。一般包括以下三個過程，一是破裂細胞膜和核膜；二是純化核酸，即去除蛋白質等影響后續PCR反應的雜質；三是洗脫核酸。通過提取處理雖然可以獲得純度比較高的核酸，但是核酸提取過程往往會導致大量的核酸損失，同時繁瑣的提取純化步驟增加了樣本間交叉污染的風險，從而增加了后續PCR擴增失敗的可能。此外由于提取過程耗時長，成本高，有些提取方法還需借助苯酚等有害試劑，增加了操作人員感染的風險，且難以實現高通量檢測。因此，血液樣本能夠直接作為模板或經過簡單處理就能夠作為模板進行PCR擴增檢測，成為血液樣本擴增需要解決的難題。

編碼白細胞介素-28B(interleukin-28B,IL28B)的基因位于人體第19號染色體上(19q13.13)，由6個外顯子和5個內含子組成，編碼IFN-λ3，是一類屬于IFN-λ家族的新型白介素編碼基因，全長1401bp。rs12979860位于IL28B基因啟動子上游3kb處，而rs8099917位于IL28B基因上游8.9kb處，rs12980275位于該基因下游的2.4kb處。在中國，IL28B基因SNPrs12979860位點CC型占84.1％，CT型占15.3％，TT型占0.6％。rs8099917和rs12980275的分布與SNP rs12979860類似。IL28B基因多態性與肝炎患者病毒感染慢性化及干擾素(IFN)抗病毒療效具有相關性。

近年來也有權威指南陸續指出IL28B對于肝炎治療的重要性。2011年3月，歐洲肝臟研究學會(EASL)推出其首部《HCV感染診治指南》，關于抗病毒治療療效的預測，EASL指南增加了IL28B宿主基因型這個重要的預測因素，2014年歐洲肝病學會又更新了《HCV感染診治指南》。新的研究還顯示，IL28B基因多態性還可以預測Peg-IFN、利巴韋林標準治療與新的直接抗HCV的小分子藥物(DAA，如特拉潑維等)三聯治療療效。

2014年8月，美國肝病研究學會(AASLD)更新了《基因1型慢性HCV感染治療指南》，該指南推薦，對于標準治療聯合DAA的三聯療法，IL28B基因型也是預測患者獲得持續病毒學應答的強有力因素，在治療前，應考慮對患者進行IL28B基因型的檢測。

2014年3月份在澳大利亞布里斯本召開的亞太肝臟研究學會(APASL)第23屆年會上，公布了2014版亞太地區《丙型肝炎病毒感染共識和治療程序》，確定了IL28基因在丙型肝炎治療中的地位。該指南明確指出：IL28B位點的SNP，rs12979860CC基因型是HCV自發清除的有力決定因素；急性丙肝可觀察8-16周，等待自發清除，特別是有癥狀的患者。但攜帶不利IL28B基因表型者可在12周前即開始治療，因為自發清除可能性很低；由于IL28B的因素，亞洲基因1型患者用三聯治療，大部分患者將只需要6個月的治療。此外，FDA允許在藥物標簽中標注IL28B基因為Peginterferon alfa-2b、Boceprevir和Telaprevir這三種藥物的基因組學生物標記物。目前丙型肝炎的標準治療方案為Peg-IFN/RBV。