[發明專利]一種高產雄烯二酮的重組分枝桿菌及構建方法及應用有效
| 申請號： | 202010140954.8 | 申請日： | 2020-03-03 |
| 公開（公告）號： | CN111454871B | 公開（公告）日： | 2022-06-14 |
| 發明（設計）人： | 齊崴;尤生萍;張偉;常紅星;錢建武;蘇榮欣 | 申請（專利權）人： | 天津大學 |
| 主分類號： | C12N1/21 | 分類號： | C12N1/21;C12N15/74;C12P33/02;C12R1/32 |
| 代理公司： | 天津市北洋有限責任專利代理事務所 12201 | 代理人： | 陸藝 |
| 地址： | 300350 天津市津南區海*** | 國省代碼： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 高產 雄烯二酮 重組 分枝桿菌 構建 方法 應用 | ||
1.一種產雄烯二酮的重組分枝桿菌，其特征是用下述方法構建：將膽固醇氧化酶基因ChoM2、攜帶有RBS片段的甾酮C27單加氧酶基因Smo2和攜帶有RBS片段的17β-羥固醇脫氫酶基因Hsd4A導入新金分枝桿菌（Mycobacterium sp.） CICC 21097中，得到產雄烯二酮的重組分枝桿菌MNCSH；
所述膽固醇氧化酶基因ChoM2的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；
所述RBS片段的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；
所述甾酮C27單加氧酶基因Smo2的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；
所述17β-羥固醇脫氫酶基因Hsd4A的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；
所述產雄烯二酮的重組分枝桿菌的構建方法，包括如下步驟：將膽固醇氧化酶基因ChoM2和質粒pMV261通過酶切，連接，構建單基因過表達重組質粒pMV261-ChoM2；將攜帶有RBS片段的甾酮C27單加氧酶基因Smo2和重組質粒pMV261-ChoM2通過酶切，連接，構建雙基因過表達重組質粒pMV261-ChoM2-Smo2；將攜帶有RBS片段的17β-羥固醇脫氫酶基因Hsd4A和雙基因過表達重組質粒pMV261-ChoM2-Smo2通過酶切，連接，構建三基因過表達重組質粒pMv261-ChoM2-Smo2-Hsd4A；
將三基因過表達重組質粒pMV261-ChoM2-Smo2-Hsd4A導入新金分枝桿菌感受態細胞中，獲得的陽性轉化子即為一種產雄烯二酮的重組分枝桿菌，命名為MNCSH。
2.根據權利要求1所述一種產雄烯二酮的重組分枝桿菌，其特征是所述的三基因過表達重組質粒pMV261-ChoM2-Smo2-Hsd4A中三個基因ChoM2、攜帶有RBS片段的甾酮C27單加氧酶基因Smo2和攜帶有RBS片段的17β-羥固醇脫氫酶基因Hsd4A的構建先后順序互換。
3.權利要求1或2所述重組分枝桿菌在發酵生產雄烯二酮中的應用。
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